Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Феномен внеклеточной днк: происхождение, структура и биологическая роль 11
1.1.1. Причины появления вкДНК в кровотоке 11
1.1.2. Структурная организация и размеры молекул вкДНК плазмы крови в норме и при различных заболеваниях 21
1.1.3. Биологическая роль вкДНК в норме и при некоторых заболеваниях 26
1.1.4. Концентрация вкДНК в плазме крови в норме и при различных патологических состояниях 38
1.2. Практическое значение исследования внеклеточной ДНК 40
1.2.1. ВкДНК как диагностический и прогностический критерий 40
1.2.2. Необходимость изучения вкДНК плазмы крови у новорожденных детей 42
1.3. Заключение по обзору литературы 46
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 51
2.1. Оборудование и реактивы 51
2.2. Объект исследования 53
2.3. Определение концентрации вкДНК плазмы крови 56
2.3.1. Получение плазмы крови 56
2.3.2. Выявление неспецифического взаимодействия Hoechst
33342 с белками плазмы крови 56
2.3.3. Депротеинизация и определение концентрации вкДНК в плазме крови 58
2.4. Определение фракционного состава вкДНК 59
2.5. Определение параметров ядер лимфоцитов периферической крови новорожденных детей 59
2.6. Определение содержания гиподиплоидных клеток в популяции лимфоцитов периферической крови 60
2.7. Определение мобильных генетических элементов в составе вкДНК плазмы крови новорожденных детей 61
2.7.1. Выделение вкДНК из плазмы крови на иммобилизованном сорбенте IsoCodeStix 61
2.7.2. Выделение ДНК из клеток крови 61
2.7.3. Постановка ПЦР 62
2.7.4. Детекция продуктов амплификации 63
2.8. Постановка иммуноферментного анализа для определения AT к нативной и денатурированной ДНК 63
2.9. Статистическая обработка результатов 64
ГЛАВА 3. Результаты исследования 65
3.1. Концентрация вкДНК в плазме крови новорожденных детей 65
3.2. Оценка состояния популяции лимфоцитов периферической крови новорожденных 70
3.3. Характеристика вкДНК 86
3.4. Взаимосвязь концентрации вкДНК и уровня содержания AT к ДНК
у новорожденных 93
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 104
Заключение 123
Выводы 126
Список литературы 127
