Введение
ГЛАВА 1. Крифонекроз каштана и возможные пути его преодоления (обзор литературы) 14
1.1 Предыстория проблемы и современное состояние в мире и в России.
1.2 Особенности биологии Cryphonectria parasitica 19
1.3 Cryphonectria hypovirus (CHV) и структура его генома 26
1.4 Молекулярно-биологические механизмы действия CHV 36
1.5 Вегетативная несовместимость 50
1.6 Перспективы преодоления крифонекроза 60
ГЛАВА 2. Материалы и методы 68
2.1. Биологический материал 68
2.1.1 Сбор биологического материала 68
2.1.2. Выделение и культивирование штаммов С. parasitica 69
2.2. Методы 71
2.2.1. Молекулярно-генетическая идентификация С. parasitica и CHV 71
2.2.1.1. Выделение нуклеиновых кислот 72
2.2.1.2. Обратная транскрипция 74
2.2.1.3. Амплификация 75
2.2.1.4. Детекция продуктов амплификации 75
2.2.2. Анализ геномов CHV из гиповирулентных штаммов С. parasitica 2.2.2.1. Получение препарата вирусной дцРНК 76
2.2.2.2. Синтез дц-кДНК-копии генома CHV з
2.2.2.3. Детекция и очистка дц-кДНК 79
2.2.2.4. Синтез рекомбинантной плазмиды 81
2.2.2.5. Приготовление компетентных клеток Escherichia coli 81
2.2.2.6. Трансформация клеток Escherichia coli 83
2.2.2.1. Выделение плазмидной ДНК и секвенирование генома CHV... 84
2.2.3. Анализ вегетативной совместимости штаммов С. parasitica 86
ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение 88
3.1. Состояние популяции Castanea sativa на Северо-Западном Кавказе в связи с крифонекрозом 88
3.2. Анализ вирулентных свойств и исследование внутривидового полиморфизма штаммов С. parasitica выявленных на территории РФ... 95
3.3. Выявление генетических особенностей CHV обнаруженных в штаммах С. parasitica на территории Турции и РФ 109
Заключение и выводы 116
Список использованных источников 122
