Введение
Обзор литературы 11
1. 2,4,6-Тринитротолуол (ТНТ) и формирование основополагающей концепции его микробного метаболизма 11
2. Токсичность и мутагенность ТНТ 16
3. Аэробный метаболизм ТНТ у прокариот 19
4. Анаэробный метаболизм ТНТ у прокариот 25
5. Метаболизм ТНТ у грибов 30
6. Метаболизм ТНТ у растений 35
7. Взаимодействие ТНТ и его интермедиатов с органическим матриксом почвы 38
8. Метаболизм динитротолуолов микроорганизмами 41
Экспериментальная часть 45
Материалы и методы 45
1. Источники и условия выделения микроорганизмов 45
2. Выделение и идентификация дрожжей 45
3. Культивирование дрожжей в отсутствие и в присутствии ТНТ 46
4. Световая микроскопия 47
5. Определение способности дрожжей утилизировать нитриты и нитраты 47
6. Определение способности дрожжей к гетеротрофной нитрификации 47
7. Аналитические методы 48
7.1. Спектрофотометрия 48
7.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография 48
7.3.Масс-спектрометрия 49
7.4. Хромато-масс-спектрометрия 49
7.5. Ионная хроматография 50
7.5.1. Определение нитрит- и нитрат-ионов 50
7.5.2. Определение органических кислот 50
8. Химические реактивы 51
9. Статистическая обработка результатов 51
Результаты исследований 52
1. Выделение и идентификация микроорганизмов, способных к редукции ароматического кольца ТНТ 52
2. Трансформация ТНТ штаммом Y. lipolytica AN-L15 55
2.1. Конверсия ТНТ в аэробных условиях роста при рН 6.0 55
2.1.1. Начальный этап трансформации ТНТ 55
2.1.2. Анализ продуктов восстановления ароматического кольца ТНТ 59
2.1.3. Второй этап трансформации ТНТ 64
2.1.4. Рост дрожжей и продукция органических кислот 67
2.1.5. Трансформация ТНТ в условиях роста при повышенной моляр-ности фосфатного буфера 68
2.2. Конверсия ТНТ в аэробных условиях роста при рН 7.0 68
2.3. Конверсия ТНТ в статических условиях роста на уровне рН 6.0-7.0 71
2.4. Конверсия ТНТ в анаэробных условиях роста 75
3. Трансформация ТНТ штаммом G. candidum AN-Z4 75
4. Трансформация ВЭЖХ-очищенных ТНТ-гидридных комплексов 77
4.1. Стабильность С-3 моногидридного комплекса ТНТ 77
4.2. Абиотическое взаимопревращение ТНТ-гидридных комплексов 79
4.3. Трансформация индивидуальных ТНТ-гидридных комплексов клетками дрожжей 81
5. Превращение нитрит-иона в присутствии и в отсутствие дрожжевых клеток 82
Обсуждение результатов 87
Заключение 100
Выводы 103
Литература 105
