Введение
ГЛАВА 1. CLASS Обзор литератур CLASS ы 13
1.1. Общая характеристика экогруппы базидиальных ксилотрофов 13
1.1.1. Биологически активные вещества, обуславливающие полезные свойства базидиальных ксилотрофов 15
1.1.2. Grifolafrondosa как типичный трутовик - ксилотроф 17
1.2. Общие представления о лектинах 19
1.3. Лектины с позиций современной гликобиологии 20
1.3.1. Лектины: попытки классификации 20
1.3.2. Лектины и углеводный код 24
1.3.3. Факторы лектиновой активности 26
1.3.3.1. Субъединичная структура лектинов . 26
1.3.3.2. Посттрансляционная модификация и множественные формы лектинов 28
1.3.3.3. Расширенный центр связывания лектина с рецептором: конфигурационная и конформационная селективность связывающих сайтов 31
1.3.3.4. Гидрофобное связывание 3 7
1.3.4. Лектин-рецепторная система как реализация эпигенетического углеводного кода: организация и функционирование 38
1.4. Лектины базидиальных ксилотрофов 43
1.4.1. Лектины базидиомицетов: общая характеристика 43
1.4.2. Лектины базидиомицетов-ксилотрофов 46
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований 51
2.1. Культуры микроорганизмов, использованные в работе 51
2.2. Условия выращивания микроорганизмов 52
2.3. Основные реактивы, использованные в работе 52
2.4.Выделение лектина с поверхности дикариотического мицелия 52
2.5. Постановка реакции гемагглютинации и получение нативных эритроцитов кролика 54
2.6. Определение специфичности выделенного лектина 55
2.7. Гель - электрофорез в денатурирующих условиях 56
2.8. Изучение химического состава лектина 56
2.9. Исследование морфолого-культуральных характеристик колоний G. frondosa 0917 в совместных культурах с A. brasilense Sp245 и его Омегон-Km мутантами 56
2.10. Изучение влияния препарата мицелиального лектина G. frondosa 0917 на подвижность клеток азоспирилл 58
2.11. Получение поликлональных кроличьих антител к лектину
G. frondosa 0917 . 59
2.12. Мечение лектина и специфических антител коллоидным золотом 59
2.13. Иммунодот-анализ на нитроцеллюлозной мембране 59
2.14. Получение Fab- и Fc- фрагментов антител 60
2.15. ИФА взаимодействия лектина со специфическими и неспецифическими антителами 60
2.16. Определение локализации лектина G. frondosa 0917 61
ГЛАВА 3. Результаты и их обсуждение 62
3.1. Обнаружение, выделение, физико-химические свойства и локализация мицелиального лектина G. frondosa 0917 62
3.1.1. Обнаружение и динамика лектиновой активности экстрактов дикариотического мицелия G. frondosa 0917 62
3.1.2. Выделение лектина G. frondosa 0917 63
3.1.3. Определение молекулярной массы лектина 65
3.1.4. Определение гликановой составляющей в растворах лектина 66
3.1.5. Углеводная специфичность лектина 67
3.1.6. Анализ химического состава лектина 69
3.1.7. Влияние температуры на стабильность лектина 71
3.1.8. Локализация лектина на мицелиальных гифах 72
3.2. Иммунохимические свойства мицелиального лектина G. frondosa 0917 73
3.2.1. Выявление специфичности связывания лектина G. frondosa 0917 с гомологичными антителами 75
3.2.2. Изучение взаимодействия лектина G. frondosa 0917 с негомологичными антителами методом ИФА 78
3.2.3. Расчет параметров взаимодействия лектина G frondosa 0917 со специфическими и неспецифическимими антителами 87
3.3. Изучение роли лектин - углеводных взаимодействий в контакте G frondosa 0917 и ризобактерий A. brasilense 93
3.3.1. Исследование морфолого-культуральных характеристик колоний G. frondosa 0917 в совместных культурах с A. brasilense Sp245 и его Омегон-Km мутантами 95
3.3.2. Изучение влияния мицелиального лектина G. frondosa 0917 на подвижность клеток азоспирилл 99
Заключение 103
Выводы 106
Список литературы 108
Благодарности 131
