Введение
Обзор литературы: Амилоидные белки 9
1. Амилоиды — структура и механизм формирования 9
2. Характерные особенности структуры амилоидов и теоретические основы подходов, применяемых при их изучении
2.1. Выявления потенциально амилоидогенных последовательностей в составе полипептидной цепи белка in silica 14
2.2. Экспериментальные подходы, применяемые при изучении структуры амилоидных фибрилл 3. Распространенность амилоидов в природе 36
4. Внеклеточные и поверхностные амилоиды микроорганизмов
4.1. Амилоиды, формирующие фимбрии (пили) бактерий 45
4.2. Амилоиды, обеспечивающие гидрофобность поверхностей микроорганизмов...46
4.3. Цитотоксичные белки, формирующие амилоиды 49
4.4. Амилоидные белки бактериальных биопленок 50
4.5. Амилоидный адгезии КС дрожжей Candida albicans 51
4.6. Амилоиды микроорганизмов и болезни 53
5. Заключение и постановка задач исследования 57
Материалы и методы 58
1. Используемые в работе реактивы 58
2. Штаммы микроорганизмов и условия их выращивания 58
3. Электрофорез в денатурирующих условиях 59
4. Вестерн-блот-анализ 60
5. Выделение клеточных стенок дрожжей 60
6. Частичная депротеинизация клеточных стенок 61
7. Экстракция белков из предварительно биотинилированных клеточных стенок дрожжей (Mrsa et al., 1997) 62
8. Выделение глюкантрансферазы Bgl2p из клеточных стенок дрожжей 63
9. Флуоресценция тиофлавинаТ
10. Спектроскопия кругового дихроизма 64
11. MALDIOF масс-спектрометрия 65
12. Микроскопические методы анализа 65
13. Определение глюкантрансферазной активности Bgl2p 66
14. Компьютерный анализ структуры белков 67
15. Эксперименты над лабораторными мышами
15.1. Введение мышам препаратов КС 68
15.2. Изучение двигательной активности и ориентировочно-исследовательского поведения подопытных мышей 68
15.3. Гистологические методы исследования 69
Результаты и их обсуждение 71
1. Компьютерный анализ аминокислотных последовательностей белков КС дрожжей S. cerevisiae 71
2. Экспериментальное выявление белков КС, обладающих свойствами амилоидов 78
3. Краткий обзор литературы: глюкантрансфераза Bgl2p из КС дрожжей S. cerevisiae. 83
4. Подбор условий выделения глюкантрансферазы Bgl2p из КС дрожжей S. cerevisiae 87
5. Характеристика свойств глюкантрансферазы Bgl2p 90
5.1. Компьютерный анализ последовательности Bgl2p 90
5.2. Экспериментальная характеристика свойств Bgl2p 95
5.3. Определение глюкантрансферазной активности Bgl2p 100
5.4. Изменения в белковом составе КС, происходящие при делении renaBGL2 106
6. Исследование влияния инъекций суспензии КС на организм мышей 110
Выводы 117
Список цитируемой литературы
