Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 13
1.1. Нарушения внутриклеточной сигнальной трансдукции как основа злокачественного роста . 13
1.2. RAS-сигнальный каскад. 14
1.3. Ras: ГЕНЫ и БЕЛКИ. 16
1.3. 1. Ras-семейства. 16
1.3.2. Ras-гены и белки в клетках млекопитающих . 19
1.3.3. Активация Ras-белков и трансформирующие свойства. 24
1.3.4. Различия между Н-, К- и N-Ras. 26
1.4. Регуляторы сигнального Ras-каскада. 28
1.5. Белки - мишени Ras. 29
1.6. Raf. 32
1.7. WNT-сигнальный каскад. 33
1.8. Нарушения в генах K-ras, Braf и АРС при некоторых онкологических заболеваниях. 37
1.8.1. Ген K-ras. Ъ1
1.8.2. Ген B-raf. 46
1.8.3. Ген АРС. 53
1.9. Нуклеиновые кислоты крови. 56
1.10. Адресная терапия (таргет-терапия). 59
ГЛАВА 2. Материалы и методы 65
2.1. Распределение обследуемых лиц по группам и характеристика изучаемых биологических образцов. 65
2.2. Забор крови. 67
2.3. Режимы центрифугирования. 68
2.4. Выделение ДНК из биоматериала. 69
2.5. Полимеразная цепная реакция (ПЦР): 71 ГЕН K-ras 72 ГЕН B-raf 78 ГЕН АРС. 80
2.6. Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ). 85
ГЛАВА 3. Результаты исследования 88
3.1.. Ген K-ras. 88
3.1.1. Оптимизация условий проведения обогащенной ПЦР для выявления мутаций в 12-ом кодоне гена K-ras . 88
3.1.2. Специфичность ПЦР гена K-ras с мутациями в 12-м кодоне и характер точковых мутаций. 105
3.2.Ген B-raf 121
3.2.1 Оптимизация условий электрофореза при оценке дефектов гена B-raf. 121
3.3. Ген АРС. 139
3.3.1. Специфичность ПЦР. 139
3.3.2. Оптимизация условий электрофореза. 140
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 147
Выводы 161
Практические рекомендации 162
Список использованной литературы
