Введение
1. Обзор литературы 6
1.1. Блок-сополимеры этиленоксида и пропиленоксида 6
1.1.1. Номенклатура 6
1.1.2. Физико-химические свойства 6
1.1.3. Аналитическое определение плюроников в присутствии липидов 8
1.2. Биологические мембраны 12
1.2.1. Структура биологических мембран 12
1.2.2. Свойства липидного бислоя 15
1.2.3. Микровязкость бислоя и способы её измерения 16
1.2.4. Липидный состав биологических мембран 18
1.2.5. Проницаемость липидных мембран 31
1.2.6. Модельные системы, используемые для исследования проницаемости мембран 34
1.3. Взаимодействие плюроников с компонентами биологических мембран. 37
1.3.1. Взаимодействие плюроников с белками 37
1.3.2. Взаимодействие плюроников с липидными структурами 39
1.3.2.1. Связывание плюроников с бислойными мембранами и их локализация вбислое 39
1.3.2.2. Влияние плюроников на проницаемость липидных мембран 43
1.4. Применение плюроников в медицинских целях 46
1.5. Множественная лекарственная устойчивость опухолей и влияние на неё плюроников 47
1.6. Использование фотоактивируемых групп для исследования локализации веществ в клетке 52
2. Постановка задачи 55
3. Экспериментальная часть 57
3.1. Материалы 57
3.2. Методы 58
3.2.1. Анализ полимеров 58
3.2.2. Введение аминогруппы в двублочный сополимер REP 59
3.2.3. Получение REP-NH2, меченного тритием 61
3.2.4. Модификация REP-NH2 флуоресцентной и фотоактивируемой группой 62
3.2.5. Определение коэффициента распределения сополимеров между гексаном и водой 64
3.2.6. Приготовление липосом 64
3.2.7. Определение микровязкости мембраны липосом 65
3.2.8. Связывание сополимеров с липосомами 66
3.2.9. Транспорт доксорубицина в липосомы с градиентом рН 67
3.2.10. Проникновение сополимера внутрь липосом 68
3.2.11. Культивирование клеток и анализ цитотоксичности доксорубицина и сополимеров 69
3.2.12. Связывание 3H-REP-NH2 с клетками 71
3.2.13. Проникновение REP-NBD внутрь клеток 71
3.2.14. Анализ взаимодействия REP-NBD с клетками методом конфокальной микроскопии 72
3.2.15. Взаимодействие клеток с REP, содержавшим фотоактивируемую метку 73
4. Результаты и их обсуждение 77
4.1. Свойства двублочного сополимера REP 77
4.2. Взаимодействие блок-сополимеров с клетками 80
4.2.1. Связывание REP с клетками разного типа 80
4.2.2. Локализация REP при связывании с клетками 83
4.2.3. Идентификация партнёров полиалкиленоксидов в мембране 87
4.3. Взаимодействие блок-сополимеров с липосомами 101
4.3.1. Взаимодействие дву- и трёхблочного сополимеров с липосомами из яичного лецитина 101
4.3.2. Влияние состава липидного бислоя на взаимодействие полиалкиленоксидов с липосомами 112
5. Заключение 124
6. Выводы 130
Список сокращений 131
Список литературы
