Введение
3 Обзор литературы 10
3.1 Феномен симбиоза P. bursaria- Chlorella 10
3.2 Общая характеристика P.bursaria 10
3.3 Общая характеристика симбиотических водорослей Chlorella sp 13
3.4 Систематическое положение симбиотических хлорелл 14
3.5 Формирование и поддержание симбиоза P. bursaria — Chlorella 17
3.6 Координация жизненных циклов хозяина и симбиотических хлорелл.20
3.7 Специфичность взаимоотношений P. bursaria- Chlorella 22
3.8 Общая характеристика вирусов хлорелл 25
3.9 Филогенетические отношения вирусов хлорелл 29
3.10. Жизненные циклы вирусов 32
3.11 Литический цикл вирусов хлорелл P. bursaria 33
3.12 Протисты и вирусы 35
3.13 Поддержание вирусов хлорелл в природных водоемах и в симбиотической системе P. bursaria - Chlorella 37
4 Материалы и методы 40
4.1 Материалы 40
4.1.1 Клоны P. bursaria 40
4.1.2 Клоны P. caudatum 40
4.1.3 Штаммы хлорелл 40
4.1.4 Штаммы вирусов хлорелл 41
4.2 Методы 50
4.2.1 Методы культивирования инфузорий 50
4.2.2 Тестирование клонов P. bursaria на наличие вирусов и определение титра вирусов 50
4.2.3 Пульс-Электрофорез 51
4.2.4 Гибридизация по Саузерну 53
4.2.5 Антитела и непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание клеток P. bursaria 54
4.2.6 Визуализация вирусов при помощи красителей SYTOX 57
4.2.7 Конфокальная микроскопия 59
4.2.8 Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ) 59
4.2.9 Метод количественного стереологического анализа 60
5 Результаты 68
5.1 Скрининг клонов P. bursaria на наличие вирусов 68
5.2 Обнаружение вирусов в клонах P. bursaria разных сингенов 69
5.3 Идентификация вирусов хлорелл в симбиотической системе P. bursaria - Chlorella методом пульс-электрофореза 70
5.3.1 Сравнительный анализ ПЭФ-профилей P.bursaria и хлорелл 70
5.3.2 Исследование природы полосы размером около 300 т.п.н. на электрокариотипах клонов P. bursaria 72
5.3.3 Локализация интегрированной ДНК вируса в симбиотической системе P. bursaria- Chlorella - вирус 74
5.3.4 Локализация неинтегрированной ДНК в симбиотической системе P. bursaria - Chlorella - вирус 74
5.3.5 Оценка количества вирусных геномов 75
5.4 Исследование локализации вирусных частиц в ассоциации с клеткой P. bursaria 84
5.4.1 Идентификация вирусов в трехкомпонентной симбиотической системе P. bursaria - Chlorella - вирус методом непрямой иммунофлюоресценции 84
5.4.2 Конфокальная микроскопия клеток P. bursaria окрашенных красителем SYTOX in vivo 92
5.4.3 Конфокальная микроскопия клеток P. bursaria in vivo инкубированных с вирусами, предварительно окрашенными красителем SYTOX 93
5.5 Исследование вирусов и парамеций методом ТЭМ 97
5.5.1 Локализация вирусных частиц в симбиотической системе P. bursaria - Chlorella - вирус 97
5.5.2 Распределение вирусных частиц на поверхности P. bursaria 98
5.5.3 Локализация вирусов в безвирусной системе P. bursaria — Chlorella 101
5.5.4 Локализация вирусов в ассоциации с P. caudatum 102
Обсуждение 114
6.1 Исследование симбиотической системы P. bursaria - Chlorella -вирус методом ПЭФ и гибридизации по Саузерну 114
6.2 Локализация вирусных частиц в симбиотической системе P. bursaria -Chlorella — вирус 117
6.3 Специфичность взаимодействия вирусов хлорелл парамеций и Р. bursaria 123
6.4 Ассоциация вирусных частиц с цилиатурой ротового аппарата Р. bursaria 126
6.5 Распределение вирусных частиц на поверхности клетки парамеции. 128
6.6 Роль P. bursaria в системе P. bursaria - Chlorella - вирус 134
6.7 Роль вирусов в эволюции и экологии симбиоза P. bursaria -Chlorella 138
6.8 Выводы 139
Приложение 143
Литература
