Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Роль модифицированных ЛНП в развитии атеросклероза 12
1.2. Модифицированные ЛНП, циркулирующие в крови человека 14
1.3. Усиление атерогенности модифицированных in vitro ЛНП в результате их ассоциации 18
2. Экспериментальная часть 26
2.1. Объекты исследования 26
2.1.1. Выделение липопротеидов из плазмы крови человека 26
2.1.2. Получение нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов из плазмы крови человека 26
2.1.3. Выделение белых клеток крови человека 27
2.1.4. Выделение и культивирование клеток интимы аорты человека 28
2.1.5. Культура макрофагов человека 29
2.1.6. Инкубация клеток с ЛНП 30
2.2. Методы исследования 30
2.2.1. Определение содержания внутриклеточного холестерина 30
2.2.2. Определение клеточного белка 31
2.2.3. Определение содержания белка в ЛНП 31
2.2.4. Определение относительного размера ЛНП (метод флуктуации светопропускания) 32
2.2.5. Приготовление I-меченых препаратов липопротеидов 32
2.2.6. Инкубация клеток с 1251-меченными ЛНП в экспериментах по изучению их связывания, захвата и деградации 33
2.2.7. Исследование деградации I-меченных ЛНП культурами клеток 34
2.2.8. Исследование ЛНП методом спиновых зондов 35
2.2.9. Исследование ЛНП методом флуоресцентных зондов и меток 39
2.2.10. Определение продуктов пероксидации липидов в ЛНП 41
2.2.11. Определение содержания сиаловой кислоты в ЛНП 42
2.2.12. Определение содержания углеводов в ЛНП 42
2.2.13. Метод твердофазного иммуноферментного анализа 43
2.2.14. Статистическая обработка данных 44
3. Результаты 45
3.1. Накопление холестерина гладкомышечными клетками аорты человека и макрофагами при инкубации их с агрегированными и не агрегированными ЛНП 45
3.1.1. Спонтанная ассоциация ЛНП вызывает накопление эфиров холестерина в гладкомышечных клетках и макрофагах. Зависимость от размера агрегатов ЛНП 45
3.1.2. Клеточный метаболизм агрегированных и не агрегированных 1251-ЛНП 47
3.1.3. Изучение механизма захвата агрегатов І-ЛНП 49
3.2. Изучение особенностей структурной организации склонных к агрегации циркулирующих множественно модифицированных ЛНП 51
3.2.1. Исследование структуры нативных и цмЛНП с использованием спиновых и флуоресцентных зондов и меток 52
3.2.2. Исследование структуры нативных и цмЛНП методом иммуноферментного анализа 62
3.3. Изучение агрегации ЛНП при изменении их сольватной оболочки 68
3.3.1. Изучение полиэтиленгликоль-индуцированной агрегации ЛНП 69
3.3.2. Агрегация ЛНП при понижении ионной силы 71
3.4. Дегликозилирование ЛНП способствует их ассоциации 78
Обсуждение результатов 84
Выводы 100
Список литературы 102
