Введение
Глава 1 Декстраны и декстранолитические ферменты 12
1.1 Структура и свойства декстранов 12
1.2 Классификация декстранолитических ферментов 14
1.3 Источники, свойства и механизм действия декстраназ 16
1.3.1 Грибные декстраназы 16
1.3.2 Дрожжевые продуценты 27
1.3.3 Бактериальные источники 28
Глава 2 Функция декстраназ в метаболизме микроорганизмов 31
Глава 3 Методы измерения декстраназной активности 33
Глава 4 Применение декстранолитических ферментов 36
4.1 Биомедицинское направление 36
4.2 Применение декстраназ в стоматологии 37
4.3 Декстраназы в сахарной промышленности 38
Собственные исследования 41
Глава 5 Объекты и методы исследований 41
5.1 Объекты исследований 41
5.2 Материалы и реагенты 41
5.3 Микробиологические методы 42
5.3.1 Накопительные питательные среды для проведения скрининга 42
5.3.2 Твердая питательная среда 43
5.3.3 Жидкие питательные среды для наработки образцов декстраназ 44
5.3.4 Условия инокуляции и хранения продуцентов декстраназ 44
5.3.5 Почвенные образцы и их подготовка для выделения новых бактериальных изолятов 45
5.4 Методы таксономических исследований 45
5.5 Физико-химические и биохимические методы исследований 46
5.5.1 Получение ферментных препаратов 46
5.5.2 Изучение реакционной специфичности декстраназ выделенных штаммов 46
5.5.3 Определение декстраназной активности 47
5.5.3.1 Полуколичественный метод определения декстраназной активности 47
5.5.3.2 Определение активности с помощью нерастворимого окрашенного субстрата 47
5.5.4 Основные этапы выделения и очистки декстраназы P. illinoisensis ИБ-101Д 49
5.5.4.1 Изучение аффинной адсорбции 51
5.5.5 Определение концентрации белка 52
5.5.6 Изучение физико-химических и каталитических свойств очищенной декстраназы 52
5.5.6.1 Определение рН-оптимума очищенной декстраназы 52
5.5.6.2 Определение температурного оптимума и термостабильности очищенной декстраназы 53
5.5.6.3 Гель-электрофорез и изоэлектрическое фокусирование 53
5.5.6.4 N-терминальный аминокислотный анализ 55
5.6 Обработка экспериментальных данных 55
ГЛАВА 6 Результаты и их обсуждение 56
6.1 Скрининг микроорганизмов, секретирующих декстраназу 56
6.2 Таксономический анализ выделенных изолятов 59
6.3 Изучение реакционной специфичности декстраназ выделенных штаммов 68
6.4 Разработка процедуры определения декстраназной активности при помощи нерастворимого окрашенного субстрата 70
6.5 Очистка и характеристика декстраназы P. illinoisensis ИБ-101Д 75
6.5.1 Очистка декстраназы P. illinoisensis ИБ-101Д 76
6.5.2 Характеристика физико-химических свойств препарата очищенной декстраназы P. illinoisensis ИБ-101Д 85
Заключение 90
Выводы 93
Список литературы 94
