Введение
ГЛАВА I. ПРИРОДА И ПРОИСХОЖДЕНИЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ МЕТИЛИРОВАННЫХ ОСНОВАНИЙ В ДНК ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ 9
1. Метилированные основания в ДНК и механизм их возникновения 9
2. Органоидная специфичность и внутригеномное распределение п?С II
ГЛАВА II. СОДЕРЖАНИЕ 5-МЕТИЛЦИТОЗИНА В ДНК ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ 15
1. Видовая специфичность 15
2. Тканевая /клеточная/ специфичность метилирования ДНК 17
3. Изменение метилирования ДНК в онтогенезе 20
4. Влияние фитогормонов и других факторов на изменение содержания 5-метилцитозина в ДНК 22
ГЛАВА III. МЕТИЛИРОВАНИЕ ДНК У РАСТЕНИЙ .... 25
1. Синтез ДНК и ее метилирование in vivo 25
2. Особенности метилирования ДНК in vitro 27
3. ДНК-метилазы эукариот и их свойства . . 29
ГЛАВА ІV. ВОЗМОЖНАЯ БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ МЕТИЛИРОВАНИЯ ДНК У ЭУКАРИОТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
I. Материалы и обьекты исследований . . . 39
2. Методы исследований 40
1. Проращивание семян пшеницы 40
2. Введение радиоактивной метки в ДНК проростков Контроль за синтезом новообразованной ДНК с помощью / Н/ тимидина 41
Исследование степени метилирования вновь синтезируемых ДНК в присутствии /2- С /
оротовой кислоты и/ 8- дЗ / аденина . . 41
3. Выделение ДНК
а/ Модифицированный метод Мармура ... 41
б/ Выделение и очистка из замороженных проростков высокомолекулярной ядерной ДНК центрифугированием в градиенте плотности С sCI 43
в/ Выделение ДНК из замороженных жидким азотом
проростков пшеницы ...... 44-
4. Подготовка препаратов ДНК для анализа нуклеотидного состава 44
5. Определение нуклеотидного состава и уровня метилирования ДНК 45
а/ Гидролиз суммарной ДНК 45
б/ Подготовка целлюлозы и пластинок ... 45
в/ Хроматография оснований 45
6. Получение бесклеточного экстракта с ДНК-метилазнои активностью
а/ Осаждение нуклеиновых кислот сульфатом стрептомицина ....... 47
б/ Фракционирование белков бесклеточного экстракта сульфатом аммония .... 48
в/ Гельфильтрация материала на Сефадексе -50
"грубый" 48
г/ Проведение реакции метилирования in vitro 4-9
7. Выделение хроматина из этиолированных проростков пшеницы 50
Прочие методы 51
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА V. ОБНАРУЖЕНИЕ ДНК-МЕТИЛАЗНОЙ АКТИВНОСТИ В БЕСКЛЕТОЧНЫХ ЭКСТРАКТАХ ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ 52
1. Особенности метода определения ДНК-метилазной активности in vitro 52
2. Получение бесклеточного экстракта из 3-х суточных этиолированных проростков пшеницы 53
ГЛАВА II СВОЙСТВА ЦИТОЗИНОВОИ.ДНК-МЕТИЛАЗЫ ИЗ ЛИСТЬЕВ 3-Х СУТОЧНЫХ ЭТИОЛИРОВАННЫХ ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ 59
ГЛАВА III. СУБСТРАТНАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ ДНК-МЕТИЛАЗЫ ИЗ ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ 68
ГЛАВА ІУ. ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЦИТОЗИНОВОИ ДНК-МЕТИЛАЗЫ ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ В КЛЕТОЧНОМ ЦИКЛЕ 72
ГЛАВА V МЕТИЛАДЕНИН В ДНК ПРОРОСТКОВ ПШЕНИЦЫ 81
1. Включение / 8- / аденина и метилирование адениновых остатков в ДНК первого листа проростков пшеницы 81
2. Адениновая ДНК-метилазная активность в первом листе этиолированных проростков пшеницы ... 84
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 89
ВЫВОДЫ 94
ЛИТЕРАТУРА 96
