Введение
СТРОЕНИЕ И ФУНКЦИИ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ II
1. МОРФОЛОГИЯ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ 12
2. СТРОЕНИЕ ОСНОВНЫХ КОМПОНЕНТОВ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ 14
2.1. Глюкан 16
2.2. Маннан 18
2.3. Хитин 22
2.4. Белок 23
3. ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ЛИЗИС КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ 26
3.1. Глюканазы 26
3.2. Маннаназы 35
3.3. Протеиназы 37
3.4. Хитиназы 41
3.5. Липазы 42
4. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ ДРОЖЕЙ 47
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 58
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ 59
I. КУЛЬТУРЫ МИКРООРГАНИЗМОВ И УСЛОВИЯ ИХ
ВЫРАЩИВАНИЯ 59
2. ПОЛУЧЕНИЕ МЕТОЧНЫХ СТЕНОК ДРОЖЖЕЙ 61
3. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ 64
3.1. Хроматография КулЬТуралЬНОЙ ЖИДКОСТИ Bac.brevis штамм 5/4 на аффинных сорбентах бацитрацин аминосилохром и фенилборонат-сефароза 64
3.2. Хроматографа серИНОВОЙ ПротеИНаЗЫ Bac.brevis штамм 5/4 на сефадексе &-75 66
4. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ АКТИВНОСТЕЙ . 67
4.1. Протеолитическая активность 67
4.2. Дрожжелитическая активность 69
4.3. Гликозидазные активности 70
5. АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ 71
5.1. Определение белка 71
5.2. Определение редуцирующих Сахаров 72
5.3. Определение общего количества белка в клеточных стенках дрожжей 72
5.4. Определение общего количества углеводов в клеточных стенках дрожжей 73
6. И3ОЭЛЕКТРОФ0КУСИРООВАНИЕ 73
7. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ 74
7.1. Электрофорез в полиакриламидном геле без додецилсульфата Na 74
7.2. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата Na 76
8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ПРОТЕИНАЗЫ
ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖЬЩКОСТИ Bac.brevis ШТАММ 5/4 . 77
8.1. Кислотный гидролиз белка 77
8.2. Определение полуцистина и метионина 77
8.3. Определение триптофана 78
8.4. Аминокислотный анализ белка 78
9. ОПРЩЕЯЕНИЕ N - КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ПРОТЕИНАЗЫ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ВДКОСТИ ВАС .BRE7IS ШТАММ 5/4 78
9.1. Предварительная денатурация белка фенолом 78
9.2. Автоматический анализ аминокислотной последовательности белка 79
10. ЗОНАЛЬНОЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ КЛЕТОК ДРОЖЕЙ С .UTILIS в ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ САХАРОЗЫ 79
11. ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ С .UTILIS 80
12. ОКРАШИВАНИЕ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ С .UTILIS ПРИМУЛИНОМ 82
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ... 83
1. ВЫБОР МИКРООРГАНИЗМА - АКТИВНОГО ПРОДУЦЕНТА ДРОКЖЕЛИТМЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ 83
2. ПРОТЕОЛИТИЧЕСКАЯ ПРИРОДА ДРОЖЖЕЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ВАС .BRE7IS ШТАММ 5/4 89
3. ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА СЕРИНОВОЙ ПРОТЕИНАЗЫ ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ВАС .BREVIS ШТАММ 5/4 95
Краткий обзор литературы 95
Полученные результаты 99
3.1. Выделение протеиназы 99
3.2. Определение аминокислотного состава секре-тируемой протеиназы Bac.brevis штамм 5/4
3.3. Определение N -концевой последовательности секретируемой протеиназы Bac.brevis штамм 5/4 105
3.4. Определение молекулярного веса секретируемой протеиназы Bac.brevis штамм 5/4 109
3.5. Определение субстратной специфичности секретируемой цротеиназы Bac.brevis штамм 5/4 112
3.6. Ингибиторный анализ 114
3.7. Влияние температуры среды инкубации на дрожжелитическую и протеолитическую активности протеиназы 116
3.8. Влияние рН среды инкубации на дрожжелити-ческую и протеолитическую активности протеиназы 116
4. ЛИТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОТЕИНАЗЫ ВАС .BREVIS НА ЖИВЫЕ МЕТКИ ДРОЖЖЕЙ С .UTILIS 121
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 136
ВЫВОДЫ 144
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 145
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 146
