Введение
Глава I. Структура растворимой АТФазы и функции ее субъединиц 9
1. Субъединичный состав растворимой АТФазы - 9
2. Нуклеотидсвязывающие центры АТШазы и их функции 13
3. Функциональные группы нуклеотидсвязывающих центров митохондриальной АТФазы 17
4. Конформационные изменения АТФазы 20
Глава II. Структура и функции АТФазного комплекса митохондрий 24
1. Мембранные компоненты АТФазного комплекса митохондрий и их функции 25
2. Локализация фактора Fj в митохондриальной мембране 27
Глава III. Методы измерения мембранного потенциала 31
I. Методы измерения электрического потенциала 31
1. Прямые методы измерения электрического потенциала 31
2. Методы определения ДУ , основанные на измерении равновесного распределения пробных зарядов 34
3. Метод липидорастворимых проникающих ионов 37
4. Измерение трансмембранного электрического потенциала с помощью флуоресцентных зондов 38
2. Методы измерения градиента рН на сопрягающих мембранах . 42
1. Титрометрический метод 42
2. Распределение проникающих кислот 42
3. Измерение ДрН с помощью флуоресцентных и спиновых зондов 43
Глава ІV. Материалы и методы 47
Препаративные методы.
1. Вьщеление митохондрий из сердца быка 47
2. Выделение субмитохондриальных частиц /СМЧ/ 48
3. Выделение марганцевых субмитохондриальных частиц 49
4. Вьщеление субмитохондриальных частиц, лишенных фактора Fj 49
5. Выделение водорастворимой АТФазы /фактор Fj/ . 50
6. Реконструкция фактора FT с мембраной СМЧ 52
7. Модификация фактора Fj с профлавином 52
8. Модификация фактора Fj спиновыми метками 53
Аналитические методы
1. Определение концентрации белка 54
2. Определение АТШазной активности фактора Fj и субмитохондриальных частиц 54
3. Электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии денатурирующих реагентов 55
4. Измерение спектров флуоресценции профлавина . 55
5. Измерение электрического потенциала ДЧ с помощью проникающих анионов 55
6. Измерение спектров Электронного Парамагнитного Резонанса/ЭПР/ 56
Глава V. Модификация митохондриального фактора спиновыми метками и разделение модифицированного фермента на субъединицы 58
Глава VІ. Локализация фактора Fj В митохондриальнои мембране 72
Глава VII. Измерение градиента рН на мембране субмитохондриальных частиц 85
Выводы III
Литература 112
