Введение
Глава I. Источники, структура и механизм действия р-галактозидаз 6
1.1. Классификация р-галактозидаз 6
1.2. Р-Галактозидазы растений 8
1.3. Р-Галактозидазы млекопитающих и человека 9
1.4. Р-Галактозидазы микроорганизмов 14
1.4.1. Бактериальные Р-галактозидазы 14
1.4.2. Грибные и дрожжевые Р-галактозидазы 16
1.4.3. Третичная структура р-галактозидаз 18
1.5. Механизм каталитического действия р-галактозидаз 24
1.5.1. Каталитическая активность Р-галактозидаз 24
1.5.2. Механизм каталитического действия р-галактозидаз 29
1.5.3. Активаторы и ингибиторы Р-галактозидаз 33
Глава II. Биокатализаторы на основе Р-галактозидазы 37
2.1. Практическое использование Р-галактозидаз 37
2.2. Адсорбция и другие физические методы иммобилизации Р-галактозидаз 42
2.3. Химические методы иммобилизаци р-галактозидаз (ковалентное связывание) 47
2.4. Свойства и применение иммобилизованных Р-галактозидаз... 52
Глава III. Объекты и методы исследования 60
3.1. Характеристика ферментов и использованных химических реактивов 60
3.1.1. Ферменты 60
3.1.2. Химические реактивы 62
3.1.3. Буферные растворы 63
3.2. Определение ферментативной активности р-галактозидазы 64
3.3. Методика изучения термоинактивации фермента 67
3.3.1. Термоинактивация Р-галактозидазы в растворе 67
3.3.2. Термоинактивация Р-галактозидазы в адсорбционных слоях 67
3.4. Адсорбционная иммобилизация р-галактозидазы 68
3.4.1. Адсорбционная иммобилизация р-галактозидазы на силикагеле 68
3.4.2. Получение совместных адсорбционных слоев фермента и полисахаридов 69
3.5. Количественное определение белка методом Брэдфорда 69
3.6. Оценка пофешностей в определении экспериментальных величин 70
Глава IV. Механизм реакции гидролиза гликозидной связи субстрата в активном центре Р-галактозидазы из Escherichia coli в рамках теории цепей перераспределения связей 73
4.1. Механизм реакции. 73
4.2. Влияние метанола на гидролиз орто- и пара-нитрофенил-Р-галактопиранозидов Р-галактозидазой из Escherichia coli ... 76
4.3. Структурный анализ аминокислотных последовательностей . Р-галактозидаз из различных источников 83
Глава V. Термоинактивация Р-галактозидаз из различных источников 88
5.1. Ассоциативно-диссоциативные процессы в растворах р-галактозидаз 88
5.1.1. Диссоциация и удельная активность олигомеров Р-галактозидаз 89
5.1.2. р-Галактозидаза животного происхождения из печени быка 94
5.1.3. Р-Галактозидаза бактериального происхождения из Escherichia coli 96
5.1.4. Р-Галактозидаза дрожжевого происхождения из Kluyveromyces fragilis 99
5.1.5. Удельные активности олигомерных форм р-галактозидаз 101
5.2. Термоинактивация Р-галактозидаз различного происхождения 102
5.2.1. Кинетические механизмы термоинактивации 102
5.2.2 Диссоциативная термоинактивация р-галактозидаз 107
5.2.3. Индукционный период на кривых термоинактивации р-галактозидаз 115
5.3. Влияние различных факторов на стабильность р-галактозидаз 117
5.3.1. Активность и стабильность Р-галактозидаз 118
5.3.2. Влияние температуры на стабильность Р-галактозидаз 120
5.3.3. Влияние катионов магния на стабильность р-галактозидазы из Escherichia coli 123
5.4. Термоинактивация и параметры стабильности олигомерных ферментов 125
5.5. Некоторые особенности термоинактивации Р-галактозидазы животного происхождения из печени быка 127
Глава VI. Адсорбционные слои р-галактозидазы из Penicillium canescens на силикагеле и их стабилизация полисахаридами 133
6.1. Адсорбционная иммобилизация Р-галактозидазы 133
6.1.1. Адсорбция р-галактозидазы Penicillium canescens на силикагеле 133
6.1.2. Каталитические свойства адсорбционных слоев Р-галактозидазы 135
6.1.3. Кинетика адсорбции Р-галактозидазы на силикагеле 137
6.2. Совместные адсорбционные слои р-галактозидазы и полисахаридов на поверхности силикагеля 143
6.2.1 Каталитические свойства совместных адсорбционных слоев Р-галактозидазы и полисахаридов 144
6.2.2. Термостабильность адсорбционных слоев р-галактозидазы... 146
Выводы 151
Список литературы 153
