Введение
2. Обзор литературы. 12
2.1. Иммуноглобулины. Основные понятия. 12
2.1.1. Структура. 12
2.1.2. Типы иммуноглобулинов. 14
2.1.3. Генетические основы многообразия иммуноглобулинов. 16
2.1.4. Связывание гаптена. 18
2.1.5. Гибридомы и моноклональные антитела. 20
2.2. Абзимы — биокатализаторы с неограниченными возможностями. 21
2.2.1. Применение в медицине. 21
2.2.2.Применение в химии. 22
2.2.3. Возможная роль абзимов в химии углеводов . 23
2.3. Иммунная система обладает внутренним свойством генерировать абзимы при различных патологиях. 26
2.4. Возможные механизмы образования абзимов. 28
2.4.1. Анти-идиотипический. 28
2.4.2. Иммунный ответ на гаптен. 30
2.5. Доказательство принадлежности каталитической активности антителам. 30
2.6. Ферментативные свойства природных абзимов, гидролизующих нуклеиновые кислоты и фосфорилирующих белки. 32
2.7.Проблемы получения гомогенных препаратов абзимов. 38
2.8. Специфические субстраты для исследования глюкозидгидролаз. 42
2.8.1. Использование хромо- и флуорогенных меток . 42
2.8.2. Применение ферментативного подхода для синтеза субстратов. 46
3. Материалы и методы. 49
3.1. Реактивы и ферменты. 49
3.2. Синтез субстратов. 49
3.2.1. п-Нитрофенил-а-О-глюкопиранозид. 49
3.2.2. Индол этил-p-D-глюкопиранозид. 49
3.2.3 MeUmb-, pNp- и Ind-мальтоолигосахариды 50
3.2.4.рЫр-(МеишЬ)-4.6-0-бензилиден-(этилиден-)-мальтоолигосахариды. 50
3.2.5. Индол этил- p-D- гал актопиранозил-4-О- 6HC-(O>D-глюкопиранозил)-4-0-а-0-глюкопиранозид. 50
3.2.6. Индолэтил 6-г4-6-(5-(2-аминоэтиламино)-1-нафталенсульфонат)-6-дезокси-р-0-галактопиранозил-4-0-бис-(а-0-глюкопиранозил)-4-0-а-0-глюкопиранозид. 51
3.3. Доноры и пациенты. 51
3.4. Выделение абзимов. 52
3.5. Получение и очистка фрагментов иммуноглобулинов. 53
3.6. Другие методы. 54
3.7. Анализ степени очистки антител методом электрофореза в денатурирующих условиях 54
3.8. Анализ амилолитической активности антител методом электрофореза в денатурирующих условиях 54
3.9. Доказательство принадлежности амилолитической активности антителам. 55
3.10. Проверка активности. 56
3.11. Тип действия. 57
3.12. Измерение флуоресценции. 57
3.13. Анализ трапсгликозилируюшей активности. 58
4. Результаты и обсуждение. 59
4.1. Электрофоретическая гомогенность препаратов абзимов. 59
4.2. Синтез субстратов. 63
4.3. Амилолитическая активность различных препаратов иммуноглобулинов . 65
4.4. Гидролитические свойства амилолитических абзимов. 70
4.4.1. рН-зависимость гидролиза субстратов. 70
4.4.2. Кинетические параметры гидролиза. 71
4.4.3. Зависимость каталитической эффективности от длины субстрата. 73
4.5. Тип действия. 74
4.5.1. а-Глюкозидазная активность. 76
4.5.2. Анализ конечных продуктов гидролиза субстратов. 77
4.5.3. Сравнительный анализ начальных и конечных продуктов гидролиза субстратов. 78
4.5.4. Различия в специфичности связывания субстратов препаратами антител из крови пациентов с СКВ. 80
4.6. Другие гликозидгидролазные активности. 82
4.7. Анализ констант ингибирования. 83
4.8. Трансгликозилирующая активность абзимов. 84
4.9. Субстратная специфичность абзимов в сравнении с а- амилазами. 84
4.10. Возможные пути образования амилолитических абзимов у людей с аутоиммунными заболеваниями и в человеческом молоке. 85
4.11. Тестирование амилолитической активности — дополнительный критерий для диагностики аутоиммунных заболеваний. 86
5. Заключение 87
6. Выводы 89
7. Публикации по теме диссертации 90
8. Благодарности 91
9. Список литературы 92
