Введение
1. Функционирование днк и ее эффекторов в организме и электрохимические методы их определения, в том числе с использованием ДНК-биосенсоров (литературный обзор) 14
1.1. Роль ДНК в организме человека. Взаимодействие ДНК с ионами металлов и их комплексами 14
1.2 Биологическая роль кобальта и меди в организме человека и их действие на ДНК 21
1.3. Взаимодействие ДНК с антибиотиками и алкалоидами, обладающими противоопухолевой активностью 26
1.3.1. Методы для изучения взаимодействия противоопухолевых препаратов с ДНК и для их определения 33
1.4. Биохимический процесс гибридизации ДНК и его использование в аналитических целях
1.5. Электрохимические методы определения эффекторов ДНК на основе ДНК-биосенсоров 37
1.5.1. Иммобилизация ДНК и ее фрагментов 41
1.5.2. Электрохимические методы определения металлов, в том числе, на основе ДНК-сенсоров 44
1.5.3. Электрохимические методы определения антибиотиков и алкалоидов, в том числе, на основе ДНК-сенсоров 50
1.5.4. Электрохимические методы изучения процесса 54 гибридизации на основе ДНК-сенсоров (геносенсоров)
2. Постановка задачи, аппаратура, объекты исследования и условия проведения эксперимента
2.1. Постановка задачи 57
2.2. Аппаратура, объекты исследования 58
2.3. Приготовление биочувствительной части амперометрических ДНК-сенсоров 59
2.3.1. Методика иммобилизации д-ДНК 59
2.3.2. Методика иммобилизации р-ДНК 60
2.4. Обработка спектрофотометрических данных комплексообразования тяжелых металлов с д-ИДНК 60
2.5. Методика построения изотерм адсорбции ионов тяжелых металлов с помощью амперометрического ДНК-сенсора 61
2.6. Методика определения констант аффинного связывания комплексов М(Н) - д-ИДНК и фармпрепарат - р-ИДНК и 62 эффективных констант устойчивости комплексов фармпрепарат - р-ИДНК
3. Взаимодействие тяжелых металлов с ДНК: комплексообразование с иммобилизованной 63 формой днк и биоаффинная сорбция на ДНК-содержащей мембране биосенсора. определение тяжелых металлов с помощью днк-сенсора на основе СРПЭ
3.1. Комплексообразование ионов тяжелых металлов с денатурированной иммобилизованной ДНК на примере 63 ионов Со(П)
3.2. Биоаффинная сорбция тяжелых металлов на д-ИДНК-содержащей мембране 69
3.3. Определение константы аффинного связывания 74 комплекса Со(П) - д-ИДНК
3.4. Разработка способа определения ионов Со(Н) и ионов Со(И) и Cu(II) при совместном присутствии с помощью амперометрического биосенсора на основе д-ИДНК 78
3.4.1. Выбор оптимальных условий определения тяжелых металлов с помощью амперометрического биосенсора на основе д-ИДНК 83
3.4.2. Методика определения ионов тяжелых металлов в модельных растворах с помощью амперометрического ДНК-сенсора 86
4. Взаимодействие противоопухолевого антибиотика адрибластина с иммобилизованной ДНК в составе амперометрического ДНК- сенсора на основе српэ и его определение 90
4.1. Выбор формы ДНК для иммобилизации в составе амперометрического ДНК-сенсора и изучение комплексообразования противоопухолевых препаратов с иммобилизованной ДНК 92
4.2. Электрохимическое и спектрофотометрическое изучение комплексообразования адрибластина с ренатурированной иммобилизованной ДНК (р-ИДНК) 93
4.3. Определение константы аффинного связывания комплекса адрибластин - р-ИДНК 97
4.4. Разработка способа определения противоопухолевых препаратов с помощью амперометрического биосенсора на основе р-ИДНК 98
4.4.1. Выбор оптимальных условий определения фармпрепаратов с помощью амперометрического биосенсора на основе р-ИДНК 98
4.4.2. Методика определения адрибластина и онковина в модельных растворах с помощью амперометрического ДНК-сенсора 100
5. Взаимодействие природного алкалоида онковина, обладающего противоопухолевой активностью, с иммобилизованной ДНК в составе амперометрического днк-сенсора на основе СРПЭ и его определение
5.1. Электрохимическое изучение комплексообразования онковина с ренатурированной иммобилизованной ДНК (р-ИДНК) 104
5.2. Определение константы аффинного связывания комплекса онковин - р-ИДНК 108
5.3. Разработка способа определения онковина с помощью амперометрического БС на основе р-ИДНК 109
5.3.1. Выбор оптимальных условий определения онковина с помощью амперометрического ДНК-сенсора 110
5.3.2. Методика определения онковина с помощью амперометрического ДНК-сенсора на основе СРПЭ 112
6. Применение амперометрических ДНК-сенсоров в анализе реальных объектов
6.1. Применение амперометрического ДНК-сенсора в анализе природных вод и биологических объектов на содержание ионов Со(П) и Cu(II) 115
6.2. Применение амперометрического ДНК-сенсора в анализе сыворотки крови на содержание адрибластина и онковина 120
Выводы 124
Список литературы 126
