Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Общая характеристика парвовирусов. 10
1.2. Систематика подсемейства Densovirinae. 15
1.3. Денсовирус рыжего таракана (BgDV1). 20
1.4. Роль сплайсинга в реализации генетической информации парвовирусов . 26
1.5. Внутриклеточный трафик парвовирусов. 31
1.5.1. Взаимодействие вириона с рецептором клетки и его проникновение внутрь клетки. 31
1.5.2. Транспорт парвовирусов через систему эндосом. 33
1.5.3. Структурные изменения капсида и выход из эндосомы. 34
1.5.4. Передвижение вируса в цитоплазме и проникновение в ядро. 36
1.5.5. Вход в ядро и «раздевание» вируса. 37
1.6. Транспорт вирусных белков через ядерный поровый комплекс . 39
1.6.1 Общая характеристика ядерного порового комплекса. 39
1.6.2 Роль фосфорилирования в регуляции транспорта вирусных белков через ядерный поровый комплекс. 43
1.7. Дрозофила как модель для генетических исследований. 44
1.8. Врожденный иммунитет Drosophila melanogaster. 46
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1. Общая характеристика методов амплификации и клонирования фрагментов ДНК. 51
2.2. Амплификация фрагментов ДНК, соответствующих открытым рамкам считывания капсидных белков BgDV1. 51
2.3. Электрофорез фрагментов ДНК. 52
2.4. Очистка фрагментов ДНК. 52
2.5. Клонирование фрагментов ДНК. 53
2.6. Трансформация бактерий. 54
2.7. ПЦР с использованием клеток единичной колонии E. coli. 54
2.8. Выделение плазмидной ДНК. 55
2.9. Поддержание культур клеток млекопитающих, трансфекция. 2.10. Иммунногистохимическое окрашивание клеток антителами. 57
2.11. Сайт-направленный мутагенез. з
2.12. Получение трансгенных линий D. melanogaster. Индукция экспрессии чужеродного генетического материала. 58
2.13. Выделение РНК, синтез кДНК. 59
2.14. Определение последовательности нуклеотидов ДНК. 60
2.15. Электрофорез белков в денатурирующем геле. Вестерн-блот гибридизация. 60
2.16. ПЦР в реальном времени. 60
2.17. Секвенирование нового поколения (NGS). 61
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение
3.1. Исследование внутриклеточной локализации капсидных белков денсовируса BgDV1 в культурах клеток млекопитающих. 62
3.2. Экспрессия генов капсидных белков VP2 и VP3 в трансгенных линиях D. melanogaster. 69
3.3. Транскриптомный анализ дифференциально-экспрессирующихся генов в трансгенных дрозофилах с интегрированным в геном нормальным и мутантным (изменение сигнала ядерной локализации - NLS)
чужеродным геном VP2. 75
Выводы 84
Список использованной литературы
