Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 Классификация острых миелоидных лейкозов 9
1.2 Мутация t(8;21), приводящая к образованию слитного онкобелка AML1-ETO 15
1.2.1 Транскрипционный фактор AML1 (RUNX1) 15
1.2.2 Репрессор транскрипции ETO 17
1.2.3 Слитный белок AML1-ETO 21
1.3 Рецепторная тирозинкиназа KIT 31
1.3.1 Структура гена с-kit и белка KIT 32
1.3.2 Активация рецепторной тирозинкиназы KIT 33
1.3.3 Экспрессия тирозинкиназы KIT в различных типах клеток 34
1.3.4 Заболевания, вызываемые мутациями в гене с-kit 35
1.4 Сигнальные пути, активность которых находится под контролем рецепторной тирозинкиназы KIT 36
1.4.1 Сигнальный путь PI3K/Akt 37
1.4.2 Сигнальный путь RAS/ERK 39
Глава 2. Материалы и методы 51
2.1 Материалы 51
2.2 Методы
2.2.1 Культивирование клеток 57
2.2.2 Криоконсервация клеток з
2.2.3 Получение лентивирусных векторов, направляющих синтез малых шпилечных РНК 58
2.2.4 Получение рекомбинантных лентивирусных частиц, несущих лентивирусные векторы, содержащие shРНК 59
2.2.5 Трансдукция клеток линии Kasumi-1 с помощью рекомбинантных лентивирусных частиц 60
2.2.6 Выделение РНК 60
2.2.7 Построение кДНК 61
2.2.8 ПЦР 62
2.2.9 Электрофорез в агарозном геле
2.2.10 ПЦР в реальном времени 63
2.2.11 Вестерн-блот анализ 64
2.2.12 Детекция экстраклеточного домена белка KIT с помощью антител, конъюгированных с красителем 68
2.2.13 Измерение уровня апоптоза 68
2.2.14 Измерение клеточного цикла 69
2.2.15 Измерение скорости пролиферации 69
2.2.16 Подсчет доли живых клеток в популяции 70
Глава 3. Результаты и обсуждение 71
3.1 Подавление экспрессии онкогенов AML1-ETO и с-kit с помощью лентивирусных векторов, направляющих синтез shРНК 71
3.2 Влияние подавления активированных онкогенов AML1-ETO и с-kit на функциональные характеристики клеток 78
3.3 Анализ профиля экспрессии сигнальных путей в популяции клеток Kasumi-1 при подавлении онкогена AML1-ETO 84
3.4 Совместное подавление AML1-ETO и ERK2-киназы 87
Заключение 105
Выводы 107
Благодарности 108
Список используемых сокращений 109
Список литературы
