Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1 Введение 9
1.1.1 В-ХЛЛ, этиология, диагностические критерии 11
1.1.2 Классификация 13
1.1.3 Гипотезы влияния генетических нарушений на патогенез В-ХЛЛ 15
1.1.3 Цитогенетические и молекулярно-биологические маркеры, как факторы прогноза 16
1.2 Хромосомные мутации 18
1.2.1 Делеция 13 хромосомы 18
1.2.2. Делеция llq хромосомы 20
1.2.3. Трисомия 12 хромосомы 22
1.2.4. Делеция 17р хромосомы 23
1.3. Мутации генов при В-ХЛЛ 24
1.3.1. Мутации гена ТР53 24
1.3.1.1 Показания к исследованию статуса ТР53 26
1.3.1.2 Клиническое значение обнаружения мутации ТР53 27
1.3.2. Мутации гена NOTCH1 28
1.3.2.1 Клиническое значение мутаций NOTCH1 30
1.3.3. Мутации гена SF3B1 31
1.3.3.1 Клиническое значение мутаций гена SF3B1 32
1.3.4. Мутации гена BIRC3 33
1.4. Мутационный статус генов вариабельного региона иммуноглобулинов 33
1.4.1 Клиническое значение мутационного статуса генов вариабельного региона иммуноглобулинов 34
1.5. Бета2-микроглобулин 35
1.5.1 Клиническое значение бета2-микроглобулина 36
1.6. Анализ свободных легких цепей
5.1 Клиническое значение отношения легких цепей
1.6.Методы исследования мутаций в генах 36
1.6.1. Высоко информативные точные методы анализа 36
1.6.2. Скрининговые методы 38
Глава 2. Материалы и методы 40
2.1 Материалы и методы для FASAY 40
2.1.1 Выделение РНК 40
2.2.2. Обратная транскрипция 41
2.3.2. Амплификация кодирующей последовательности гена ТР53 для FASAY 41
2.2.2. Подготовка плазмид pSS16 и pLS76 для FASAY 41
2.2.3. Рестрикция и очистка плазмиды pSS 16 42
2.2.4. Рутинная культивация дрожжей 42
2.2.7 Функциональный анализ разделенных аллелей ТР53 в дрожжах 42
2.2. Подготовительные методы для ПЦР 44
2.2.1 Выделение ДНК из лимфоцитов переферической крови 44
2.2.2 Выделение ДНК из колоний дрожжей для 44 проведения подтверждающего секвенирования 44
2.2.3 Очистка продуктов амплификации для проведения секвенирования 44
2.3 ПЦР-методики и секвенирование 45
2.3.1 Скрининг мутаций NOTCH 1 45
2.3.2 Амплификация последовательностей генов ТР53, BIRC3, SF3B1 uNOTCHl и секвенирования по Сэнгеру 46
2.4 Анализы, проведенные другими исследователями в рамках протокола MLSG08 47
2.6 Статистика 48
ГЛАВА 3. Результаты 48
3.1 Характеристика пациентов 48
3.2 Порядок оценки эффективности и характеристика вариантов ответа 50
3.3 Фаза наблюдения и временные показатели эффективности 51
3.4 Сравнительная характеристика больных, принявших участие в протоколе 52
3.5 Статистика выявления мутаций 53
3.4.2 Мутации в гене N0TCH1 58
3.4.2 Мутации в гене ТР53 54
3.4.2.1 Результаты секвенирования гена ТР53 54
3.4.2.3 Результаты метода РА$АУЭлементы указателя не найдены 56
3.4.3 Результаты секвенирования генаSF3B1 59
3.4.4 Результаты секвенирования генаBIRC3 61
3.5 Анализ мутаций в генах ТР53, SF3B1, NOTCH1 и BIRC3 при нормальном кариотипе 61
3.6 Анализ выживаемости 62
3.7 Ответ на терапию и прогноз 67
ГЛАВА 4. Обсуждние 68
4.1 Факторы прогноза при В-ХЛЛ 68
4.2 Прогностическое значение мутаций в генах ТР53, NOTCH1, SF3B1 и BIRC3..
Заключение 76
Выводы 77
Список литературы 80
