Введение
2. Обзор литературных данных 6
1.1. Некоторые аспекты раннего эмбрионального развития 6
1.1.1. Активация эмбрионального генома 7
1.1.2. Компактизация 9
1.1.3. Стадия бластоциста 12
1.2. Нарушения раннего эмбрионального развития 13
1.2.1. Остановки развития 15
1.2.2. Фрагментация доимплантационных эмбрионов 16
1.2.3. Клеточная гибель в раннем развитии млекопитающих 18
Характерные черты апоптоза и некроза 18
Апоптоз в раннем развитии млекопитающих 24
1.3. Антисмысловые олигонуклеотиды в генной терапии 27
1.3.1. Генная терапия 27
1.3.2. Способы подавления синтеза белков 28
1.3.3. Антисмысловые олигонуклеотиды 28
Химические модификации антисмысловых олигонуклеотидов 30
Проникновение и системы доставки олигонуклеотидов в клетки 31
АсОДН как действующие агенты для терапии клеток в культурах in vitro 33
3. Материалы и методы 40
3.1. Материалы 40
3.1.1. Животные и получение эмбрионов 40
3.1.2. Вьщеление и культивирование клеток из подкожной жировой ткани человека 41
3.1.3. Реактивы и среды для культивирования 42
3.1.4. Олигонуклеотидные последовательности 44
3.2. Эксперименты на животных 45
3.2.1. Манипуляции с доимплантационными эмбрионами 45
3.2.2. Оценка интактных эмбрионов и эмбрионов после культивирования in vitro на разных сроках развития 47
3.2.3. Оценка поведенческих и репродуктивных показателей мышей 49
3.3. Эксперименты на клетках в культуре in vitro 52
3.4. Статистическая обработка данных 53
4 Результаты 55
4.1. Спонтанные нарушения раннего развития у мышей линий SAM 55
4.1.1, Нарушения развития у мышей линии SAMP1 in vivo, доимплантационная гибель 56
4.1.2, Сравнение аномалий развития у мышей линий SAM, мышей ICR и гибридов BALB/DBA, C57B16/DBA на стадии 2.5 суток развития 58
4.1.3, Нарушения развития у мышей линий SAMP1, ICR и гибридов C57B16/DBA in vitro 60
4.2. Нарушения раннего эмбрионального развития мыши при проапоптотическом воздействии 61
4.3. Раннее развитие после введения в бластоцисты мыши низкодифференцированных клеток человека 77
4.3.1. Выживаемость суспензий НСК и МСК при различных условиях хранения и изменении состава суспензионной среды 77
4.3.2. Получение инъекционных химер с НСК и МСК при различных условиях хранения и изменении состава суспензионной среды 80
4.4. Исследование эмбрионального и постэмбрионального воздействия олигонуклеотидных последовательностей, добавляемых в среду при ультивировании//! vitro 88
4.4.1. Раннее развитие после культивирования эмбрионов мыши в среде с добавлением АсОДН, специфичных к мРНК генов HRK, FASL и ВАХ человека и бессмысленной олигонуклеотидной последовательности 88
4.4.2. Постимплантационное развитие после культивирования эмбрионов мыши в среде с добавлением АсОДН, специфичных к мРНК генов HRK, FASL и ВАХ человека 90
4.4.3. Оценка поведения и репродуктивных способностей мышей, полученных после культивирования эмбрионов в среде с добавлением АсОДН, специфичных к мРНК генов HRK и FASL человека 93
4.4.4. Влияние АсОДН, специфичных к мРНК гена PPARy, на адипогенную дифференцировку клеток, полученных из жировой ткани 96
4.5. Влияние АсОДН, специфичных к мРНК гена Hrk мыши, на динамику спонтанных и индуцированных нарушений раннего развития 100
5. Обсуждение результатов 102
5.1. Спонтанные нарушения раннего развития у мышей линий SAM 102
5.2. Нарушения раннего эмбрионального развития мыши при проапоптотическом воздействии ПО
5.3. Раннее развитие после введения в бластоцисты мыши низкодифференцированных клеток человека 112
5.4. Неспецифические и специфические эффекты антисмысловых олигодезоксинуклеотидов 114
5.5. Влияние АсОДН, специфичных к мРНК проапоптотических генов на раннее эмбриональное развитие 118
6. Заключение 122
7. Выводы 124
8. Список цитированной литературы
