Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Гибриды соматических клеток и их выделение 11
1.2. Сегрегация хромосом в гибридах соматических клеток 14
1.2.1. Предполагаемые механизмы сегрегации хромосом в гибридах соматических клеток 16
1.3. Гибридные клетки, полученные от слияния эмбриональных стволовых и соматических клеток 21
1.3.1. Сегрегация хромосом в клеточных гибридах, полученных слиянием эмбриональных стволовых и соматических клеток 25
1.4. Цитогенетические методы идентификации родительских хромосом в клеточных гибридах 28
1.4.1. Дифференциальное окрашивание хромосом 28
1.4.2. Методы in situ гибридизации 29
1.4.3. Исследование клеточных гибридов и химерных мышей с помощью цитогенетических методов 32
ГЛАВА 2. Материалы и методы 34
2.1. Материалы 34
2.1.1. Клеточные линии...: 34
2.1.2. ДНК пробы 35
2.2. МЕТОДЫ 35
2.2.1. Приготовление препаратов метафазных хромосом 35
2.2.3. QFD - дифференциальное окрашивание метафазных хромосом 36
2.2.4. Бнотинилирование зондов 36
2.2.5. FISH с видоспецифичными зондами, мечеными биотином 37
2.2.6. FISH с геномной ДНК М. caroli 38
2.2.7. Двухцветная FISH с видоспецифичным и хромосомо-спсцифичным зондами 39
2.2.8. FISH с хромосомо-специфичным зондом на Y-хромосому 40
2.2.9. Микроскопирование и обработка изображений 40
ГЛАВА 3. Результаты 41
3.1. Анализ кариотипаэс клеток родительской линии нм-1 41
3.2. Исследование динамики числа хромосом в клеточных гибридах типа эс-эс 47
3.3. Цитогенетический анализ клонов межвидовых гибридных клеток 51
3.3.1. Распределение числа хромосом в клетках гибридных клонов 51
3.3.2. Анализ соотношения хромосом М. musculus и М. caroli в гибридных клетках 55
3.3.3 Исследование сегрегации гомеологов хромосом 1, 17 и X в клонах гибридных клеток 62
3.3.3.1. Сегрегация Х-хромосом 62
3.3.3.2. Сегрегация гомеологов хромосомы I 67
3.3.3.3. Сегрегация гомеологов хромосомы 17 72
3.3.4. Анализ элиминации Y-хромосомы М. musculus в гибридных клетках 75
3.3.5. Хромосомные перестройки в клонах гибридных клеток серии НМС 77
ГЛАВА 4. Обсуждение 80
Выводы 90
Список литературы 92
Приложение 105
