Введение
Глава 1. Многообразие пероксидаз и их роль в жизни растений (обзор литературы) 10
1.1. Основные свойства пероксидаз растений 10
1.1.1. Структура фермента пероксидазы 10
1.1.2. Физико-химические свойства пероксидаз 11
1.1.3. Молекулярное разнообразие фермента пероксидазы 13
1.1.4. Молекулярное разнообразие генов пероксидазы 18
1.2. Физиологические функции пероксидаз в растении 19
1.2.1. Роль пероксидаз в лигнификации клеточных стенок 20
1.2.2. Участие пероксидаз в ответных реакциях растения на стресс 22
1.3. Регуляция активности пероксидазы и ее участие в трансдукции элиситорного сигнала 26
Глава 2. Материалы и методы 40
2.1 Объекты исследований 40
2.2. Условия проведения опытов 40
2.3. Фитопатогены и методы работы с ними 40
2.3.1. Визуальная оценка пораженности растений фитопатогенами 40
2.3.2. Инфицирование растений 41
2.4. Методы биохимических исследований 42
2.4.1. Фиксация растительного материала для биохимических исследований 42
2.4.2. Получение ферментных экстрактов свободной и связанной с клеточными стенками пероксидазы 43
2.4.3. Определение активности пероксидаз 43
2.4.4. Определение активности оксалатоксидазы 44
2.4.5. Колориметрический метод определения белка по Бредфорду 44
2.4.6. Изоэлектрофокуссирование пероксидаз 45
2.5. Молекулярно-биологические исследования 45
2.5.1. Выделение и очистка ДНК из растений 45
2.5.2.Выделение и очистка РНК из растений 46
2.5.3. Измерение концентрации ДНК и РНК 47
2.5.4. Олигонуклеотидные праймеры, использованные в ГИДР 47
2.5.5.Полимеразная цепная реакция ДНК 48
2.5.6. Реакция обратной транскрипции РНК и полуколичественный анализ экспрессии генов 48
2.5.7. Электрофорез фрагментов ДНК и РНК в агарозных и полиакриламидных гелях. 49
2.5.9. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей 49
2.6. Статистическая обработка результатов 49
Глава 3. Результаты и обсуждение 51
3.1. Устойчивость образцов Aegilops umbellulata к Septoria nodorum Berk, в связи с активностью пероксидаз различной локализации в клетке. 51
3.1.1. Анализ образцов Aegilops umbellulata Zhuk. на устойчивость к Septoria nodorum Berk . 51
3.1.2. Связь устойчивости образцов Aegilops umbellulata Zhuk. к Septoria nodorum Berk, с активностью пероксидазы различной локализации 58
3.2. Выявление в структуре фермента пероксидазы пшеницы сайтов, ответственных за сорбцию к полисахаридам. 62
3.3. Участие оксидоредуктаз в ответных реакциях пшеницы на грибную инфекцию 72
3.3.1. Пероксидазы в защитных реакциях растений пшеницы, различающихся по устойчивости к возбудителю септориоза S. nodorum 72
3.3.2. Защитная роль оксалатоксидазы при поражении пшеницы возбудителем корневой гнили Bipolaris sorokiniana 16
3.2.3. Влияние инфицирования фитопатогенным грибом В. sorokiniana на активность пероксидаз различной локализации в растениях устойчивой и восприимчивой пшеницы 80
3.4. Регуляция индукторами устойчивости уровня экспрессии анионной пероксидазы в растениях пшеницы при грибном патогенезе 83
3.4.1. Участие хитоолигосахаридов в защитных реакциях растений пшеницы при инфицировании возбудителем корневой гнили В. sorokiniana 83
3.4.2. Влияние салициловой кислоты на уровень экспрессии гена анионной пероксидазы пшеницы при инфицировании каллусов S.nodorum 89
Заключение 91
Выводы 93
Список литературы 94
