Введение
Глава 1. Обзор литературы 16
1.1. Морфогенетические и генетические аспекты дифференцировки пола и развития половой системы у человека 16
1.1.1. Морфогенез и развитие мочеполовой системы у человека 16
Генетическая детерминация и дифференцировка пола у человека 25
Генетическая регуляция развития репродуктивной системы у человека 26
Гаметогенез у человека: сперматогенез и оогенез. Митоз и мейоз 33
Половые хромосомы человека, их аномалии и роль в формировании пола и репродуктивной функции 36
Х-хромосома человека. Инактивация хромосомы X 37
Псевдоаутосомные (PAR) регионы человека, области X-Y гомологии 40
Y-хромосома человека 44
Гены SRY и SOX3 46
Локус AZF («фактор азооспермии») 47
Полиморфизм Y-хромосомы 49
Рекомбинация половых хромосом и механизмы образования их структурных перестроек 50
Аномалии половых хромосом 51
Численные аномалии половых хромосом 51
Гоносомный мозаицизм. Изодисомия по половым хромосомам 53
Химеризм 54
Структурные аномалии половых хромосом 55
Микроструктурные перестройки половых хромосом 62
Клинические аспекты нарушений развития и/или функции 68
репродуктивной системы, связанных с аномалиями гоносом Синдром Клайнфельтера и его варианты 69
Синдром 47,XYY-мужчина (дисомия Y) 71
Трисомия X 72
Синдром Шерешевского-Тернера 73
Мозаицизм X/XY и его варианты 75
ХХ-инверсия пола (46,ХХ тестикулярная форма НПФ) 77
Овотестикулярная форма НПФ (истинный гермафродитизм) 79
ХХ-дисгенезия гонад. 80
XY-дисгенезия гонад 81
1.5.10 Синдром тестикулярной дисгенезии
Экспериментальная часть
Глава 2. Материалы и методы исследования 86
2.1. Характеристика выборки обследованных пациентов 86
2.2. Общеклинические методы 88
2.3. Спермиологическое исследование 88
2.4. Гистологическое исследование биоптатов гонад 89
2.5. Стандартное питогенетическое исследование
2.5.1. Культивирование лимфоцитов периферической крови 90
2.5.2. Приготовление препаратов метафазных хромосом и интерфазных ядер 90
2.5.3. G(GTG) окрашивание хромосом 91
2.5.4. C(CBG) окрашивание хромосом 91
2.5.5. Принцип анализа хромосомных препаратов 92
2.6. Молекулярно-питогенетическое исследование 92
2.6.1. Принцип на соматических клетках.анализа флюоресцентных сигналов после проведения флюоресцентной гибридизации in situ 94
2.6.2. Флуоресцентная гибридизация in situ на ядрах сперматозоидов 94
2.7. Молекулярно-генетическое исследование 96
2.7.1. Выделение геномной ДНК 96
2.7.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 97
2.7.3. Анализ локуса SRY 98
2.7.4. Анализ последовательностей короткого плеча Y-хромосомы 99
2.7.5. Анализ последовательностей длинного плеча Y-хромосомы 100
2.7.6. Электрофорез в полиакриламидном геле 101
2.7.7. Анализ QF-PCR (количественная флюоресцентная полимеразная цепная реакция, КФ-ПЦР) 102
2.7.8. Анализ мутаций гена SOX3 103
2.7.9. Исследование CAG-повтора экзона 1 гена рецептора андрогенов (AR/HUMARA) и анализ инактивации хромосомы X 104
2.8. Статистические методы 105
ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение 107
3.1. Частота хромосомных аномалий у пациентов с нарушением репродукции 107
3.2. Питогенетическое и молекулярное обследование пациенток с синдромом Шерешевского-Тернера и его вариантами
3.2.1. Питогенетическое обследование пациенток с синдромом Шерешевского-Тернера 113
3.2.2. Молекулярно-питогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациенток с синдромом Шерешевского-Тернера 118
3.3. Цитогенетическое, молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациентов мужского пола со структурными перестройками Y-хромосомы и/или X/XY мозаицизмом, не имеющих гоносомных синдромов 130
3.4. Цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациентов с кариотипом 46,XX/46,XY 144
3.5. Цитогенетическое, молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациентов с "чистой" формой XY-дисгенезии гонад 163
3.6. Цитогенетическое, молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациентов с ХХ-дисгенезией гонад 170
3.7. Цитогенетическое, молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациентов с овотестикулярной формой нарушения формирования пола 184
3.8 Цитогенетическое и молекулярно-цитогенетическое и молекулярно генетическое обследование пациентов с анорхией и монорхией 189
3.9. Цитогенетическое и молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациентов с XX-инверсией пола 195
3.10. Анализ мутаций гена SOX3 у пациентов с XX-инверсией пола и пациентов с овотестикулярной формой нарушения формирования пола 215
3.11. Картирование точек разрыва в Y-хромосоме у пациентов с цитогенетически идентифицированными несбалансированными и микроструктурными перестройками половых хромосом
3.11.1. Картирование точек разрыва в коротком плече Y-хромосомы 217
3.11.2. Картирование точек разрыва в длинном плече Y-хромосомы
3.12. Цитогенетическое, молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациентов с синдромом Клайнфельтера 231
3.13. Исследование гена андрогенового рецептора (AR) и инактивации X-хромосомы у пациентов с синдромом Клайнфельтера и пациентов с 46,ХХ тестикулярной формой НФП (синдромом 46,ХХ-мужчина ) 236
3.14. Цитогенетическое и молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследования пациентов с дисомией или полисомией Y 246
3.15. Молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование мужчин с аутосомно-гоносомными транслокациями 255
3.16. Молекулярный анализ Y-хромосомы у мужчин с нарушением репродуктивной функции и сбалансированными перестройками аутосом 264
3.17 Исследование частоты и спектра структурных аномалий Y-хромосомы у мужчин с бесплодием 269
3.18. Цитогенетическое, молекулярно-цитогенетическое и молекулярно-генетическое обследование пациентов с перицентрическими инверсиями хромосомы Y 279
3.19. Анализ микроделеций Y-хромосомы у пациентов с гетероморфизмом длинного плеча Y-хромосомы или подозрением на цитогенетические Yq делеции 283
3.20. Исследование частоты и выраженности гоносомного мозаипизма при различных гоносомных синдромах и мутациях с вовлечением Y-хромосомы или ее материала 285
3.21. Исследование нарушений сперматогенеза, мейоза и частоты анеуплоидии в сперматозоидах у пациентов с различными мутациями половых хромосом
3.21.1. Исследование сперматогенеза, нарушений мейоза у пациентов с различными мутациями половых хромосом 291
3.21.2. Исследование частоты анеуплоидии по гоносомам в сперматозоидах у мужчин с аномалиями половых хромосом в кариотипе 299
3.21.3. Анализ мейотической сегрегации хромосом X и Y у мужчин с численными или структурными мутациями половых хромосом 301
3.22.2 Исследование частоты анеуплоидии по аутосомам в сперматозоидах у мужчин с численными или структурными аномалиями половых хромосом 306
Заключение 310
Выводы 335
Практические рекомендации 339
Список литературы
