ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ .................................................................................................................... 2
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ................................................................................................. 5
ВВЕДЕНИЕ .......................................................................................................................... 1
Актуальность проблемы .................................................................................................. 1
Цель и задачи исследования ........................................................................................... 3
Положения, выносимые на защиту ................................................................................ 4
Научная новизна............................................................................................................... 4
Научно-практическая значимость .................................................................................. 5
Публикации ...................................................................................................................... 6
Апробация работы ........................................................................................................... 6
Связь работы с научными программами ....................................................................... 7
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................................................. 8
1.1 Катаболическая сигнализация в скелетной мышце................................................ 9
1.2 Анаболическая сигнализация в скелетной мышце. .............................................. 12
1.3 АТФ-зависимая сигнализация в скелетных мышцах ........................................... 15
1.4 Паннексиновые каналы в скелетной мышце ......................................................... 18
1.5 Рецепторы P2Y1 и P2Y2 в скелетной мышце ....................................................... 21
1.6 Рецепторы инозитол-3 фосфата и фосфатидилинозитол-3-киназа в скелетных
мышцах ........................................................................................................................... 28
2. ОРГАНИЗАЦИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ................................................ 32
2.1 Введение ингибитора паннексиновых каналов на фоне трехсуточного
вывешивания .................................................................................................................. 32
2.2 Введение ингибиторов рецепторов P2Y2 и P2Y1 на фоне трехсуточного
вывешивания .................................................................................................................. 33
2.3 Введение ингибитора PI3K на фоне трехсуточного вывешивания .................... 34
2.4 Выделение белка. Электрофорез с последующим вестерн-блоттингом ............ 35
2.4.1 Электрофорез в полиакриламидном геле ............................................ 36
2.4.2 Вестерн-блоттинг ................................................................................... 37
2.5 Содержание АТФ в мышце ..................................................................................... 38
2.6 Исследование экспрессии генов ............................................................................. 39
2.6.1 Выделение РНК ...................................................................................... 39
2.6.2 Обратная транскрипция ......................................................................... 40
2.6.3 Проведения ПЦР в реальном времени ................................................. 40
2.7 Статистический анализ данных. ............................................................................. 42
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ........................................................................... 43
3.1 Содержание АТФ в камбаловидной мышце на коротких сроках функциональной разгрузки ........................................................................................... 43
3.2 Роль PANX1 каналов в регуляции сигналинга в камбаловидной мышце при гравитационной разгрузке ............................................................................................. 44
3.2.1 Влияние пробенецида на вес разгруженной мышцы, содержание АТФ и экспрессию PANX1 ................................................................................................ 44
3.2.2 Влияние пробенецида на содержание катаболических сигнальных маркёров и их регуляцию ......................................................................................... 46
3.2.3 Влияние пробенецида на содержание анаболических сигнальных маркеров и сигнальные каскады, регулирующие мышечный гомеостаз ............ 49
3.3 Роль P2Y рецепторов в регуляции сигналинга в камбаловидной мышце при гравитационной разгрузке ............................................................................................. 54
3.3.1 Влияние введения ингибиторов P2Y рецепторов на вес разгруженной m.soleus, экспрессию мРНК P2Y рецепторов и энергетический гомеостаз ........ 55
3.3.2 Влияние введения ингибиторов P2Y рецепторов на катаболические процессы и содержание IP3-рецепторов в разгруженной m.soleus ...................... 57
3.3.3 Влияние ингибирования P2Y рецепторов на маркёры MAPK сигнальных путей ...................................................................................................... 63
3.3.4 Влияние ингибирования рецепторов P2Y1 и P2Y2 на маркёры, участвующие в регуляции белкового синтеза и мышечного гомеостаза ............ 64
3.4 Роль PI3K в регуляции сигналинга в камбаловидной мышце при гравитационной разгрузке ......................................................................................................................... 68
3.4.1 Влияние введения LY294002 на вес разгруженной m.soleus и энергетический гомеостаз ........................................................................................ 69
3.4.2 Влияние введения LY294002 на содержание IP3R и кальций-зависимый сигналинг ................................................................................................ 71
3.4.3 Влияние введения LY294002 на содержание катаболических сигнальных маркёров и их регуляцию .................................................................... 73
3.4.4 Влияние LY294002 на содержание анаболических сигнальных маркеров ..................................................................................................................... 75
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................................................................................................. 77
ВЫВОДЫ ........................................................................................................................... 79
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................................. 80
