Введение
II. Обзор литературы 10
1. Микроорганизмы молочнокислого брожения - биологические и молекулярно-генетические свойства 10
1.1. Таксономическое положение и филогенетические связи лактобацилл 10
1.2. Фенотипические свойства бактерий рода Lactobacillus 13
1.2.1. Биохимические свойства как основа видовой энзимоидентификации бактерий рода Lactobacillus 13
1.2.2 Некоторые биологические свойства бактерий рода Lactobacillus: адгезия, антагонизм по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам и межбактериальные взаи модействия 16
1.3. Проблемы раздельного и совместного культивирования лактобакте-рий 22
1.4. Особенности молекулярно-генетической структуры микроорганизмов рода Lactobacillus 27
1.5. Методы выделения геномной ДНК бактерий рода Lactobacillus 33
1.6. Методы индикации и идентификации бактерий рода Lactobacillus с использованием молекулярно-генетических технологий 35
2. Лактобациллы как основа пробиотических препаратов 44
2.1 .Классификация пробиотиков 44
2.2.Механизмы действия пробиотических препаратов 48
III. Материалы и методы 52
1. Исследуемые объекты 52
2. Культивирование лактобактерий и биохимическая идентификация 53
3. Полимеразная цепная реакция 55
4. Секвенирование ДНК 58
5. Определение биосовместимости лактобацилл 58
6. Исследование динамики роста популяции бактерий Lactobacillus plantarum
8 RA-3 и Lactobacillus fermentum 39 в условиях раздельного и совместно го культивирования 60
7. Статистическая обработка 62
IV. Результаты исследований и их обсуждение 63
1. Изучение биохимических свойств вновь выделенных штаммов рода Lactoba-cillus 63
2. Разработка метода индикации бактерий рода Lactobacillus на основе специфической амплификации нуклеиновых кислот 65
2.1 Разработка методики индикации бактерий рода Lactobacillus на основе ПНР гена 16SpPHK 67
2.2 Оценка эффективности методов выделения геномной ДНК из бактерий рода Lactobacillus 79
3. Разработка унифицированной схемы видовой идентификации бактерий рода Lactobacillus на основе ПНР гена 16S рРНК и ее апробация 84
3.1 Разработка методики видовой идентификации лактобацилл с использованием гнездового варианта ПНР 85
3.2 Оценка видовой специфичности ПНР лактобацилл в сравнении с классическим биохимическим методом их идентификации 93
4. Применение ПНР в характеристике популяционно-ростовых свойств микро организмов рода Lactobacillus 97
4.1. Изучение межштаммовых взаимодействий производственно значимых видов лактобацилл 97
4.2. Оценка метода ПНР при изучении динамики роста культур L. plantarum 8 RA-3 и L. fermentum 39 в условиях совместного культивирования 107
V. Заключение 114
Вьіводьі 127
Список литературы 128
