Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1. Распространение лакказ и их физиологическая роль 9
1.1.2. Растительные лакказы 11
1.1.3. Грибные лакказы 17
1.1.4. Бактериальные оксидазы с лакказной активностью 21
1.2. Структура и свойства каталитического центра 28
1.3. Механизм катализа 32
1.4. Ингибирование лакказной активности 37
1.5. Биохимические свойства лакказ 43
1.6. Биоэлектрокаталитические свойства лакказ 47
1.7. Практическое использование лакказ 55
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 57
2.1. Изучаемые ферменты 57
2.2. Стадии очистки ферментных препаратов 58
2.3. Реактивы, использованные в работе 59
2.4. Аналитические методы 60
2.4.1. Определение концентрации белка 60
2.4.2. Контроль каталитической активности 60
2.5. Определение молекулярной массы 61
2.6. Кинетические измерения 61
2.6.1. Исследование рН-зависимости реакций и кинетические исследования 61
2.6.2. Регистрация окисления хелатированных ионов Мп2+ до Мп3+, катализируемого лакказами 62
2.6.3. Определение констант ингибирования активности лакказы Т. hirsuta 63
2.7. Электрохимические методы исследования ферментов 63
2.7.1. Подготовка и модификация графитовых электродов 63
2.7.2. Подготовка и модификация стеклоуглеродного электрода 63
2.7.3. Вольтамперометрические исследования 64
2.8. Исследование продуктов окисления вератрового спирта интермедиатами, образующимися при ферментативном окислении хелатированных ионов двухвалентного марганца 65
2.9. Получение электропроводного комплекса панияіампс 66
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 68
3.1. Получение гомогенных препаратов лакказ 68
3.2.Эффективность биокаталитического окисления цианидных комплексов переходных металлов лакказами Т. hirsuta и R. vernicifera 69
3.3. Окисление ионов мп2+, хелатированных тартратными и оксалатными анионами, в присутствии грибных и древесной лакказ 76
3.4. Сравнение рн-зависимости реакций окисления субстратов-доноров электронов и доноров атомов водорода высоко и низко редокс-потенциальными лакказами 87
3.5. Возможность синтеза электропроводящего полианилина с участием высоко и низко редокс-потенциальных лакказ 91
3.6. Биоэлектрокаталитическое восстановление молекулярного кислорода на углеродных электродах с участием лакказ Т. hirsata,C. maxima И R. vernicifera 96
3.7. Электрокаталитические свойства бактериальной голубой медьсодержащей оксидазы Bacillus halodurans 104
3.8. Безмедиаторное электровосстановление молекулярного кислорода на электродах с иммобилизованной бактериальной лакказо-подобной оксидазой 110
3.9. Результаты исследования возможности использования лакказ для создания катода биотопливного элемента 113
Выводы 115
Список литературы 116
