Введение
I Обзор литературы 16
1.1 Антимикробные пептиды – многофункциональные молекулярные факторы врождённого иммунитета животных 16
1.2 Общая характеристика и биологическая активность антимикробных пептидов из тромбоцитов и кровяных пластинок 25
1.3 Общая характеристика бактерий рода Enterococcus 31
1.4 Бактериоцины энтерококков: разнообразие, свойства и практическое применение 41
II Собственные исследования 48
2.1 Материалы и методы исследований 48
2.1.1 Получение кислотных экстрактов из тромбоцитов и кровяных пластинок животных и изучение их функциональной активности 48
2.1.2 Методы изучения биологических эффектов очищенных антимикробных пептидов из тромбоцитов
2.1.2.1 Масс-спектрометрический анализ антибактериальных фракций кислотного экстракта тромбоцитов 54
2.1.2.2 Оценка антибактериальной активности антимикробных пептидов из тромбоцитов 54
2.1.2.3 Флуоресцентная микроскопия и спектроскопия в оценке биологического действия антимикробных пептидов 55
2.1.2.4 Биолюминесцентное тестирование 56
2.1.2.5 Определение дзета-потенциала бактериальных клеток при воздействии антимикробных пептидов 57
2.1.2.6 Измерение концентрации внеклеточных ионов калия при воздействии антимикробных пептидов 57
2.1.2.7 Метод изучения морфофункциональной реакции микроорганизмов на воздействие антимикробных пептидов 58
2.1.3 Выделение и идентификация бактерий рода Enterococcus 59
2.1.4 Методы изучения биологических свойств микроорганизмов
2.1.4.1 Определение факторов патогенности микроорганизмов 64
2.1.4.2 Определение факторов персистенции микроорганизмов 66
2.1.4.3 Определение антибиотикочувствительности микроорганизмов 71
2.1.4.4 Определение антагонистической активности микроорганизмов 71
2.1.4.5 Определение генетических детерминант вирулентности, персистенции, антибиотикорезистентности и бактериоциногении энтерококков 72
2.1.5 Метод воспроизведения экспериментальной листериозной инфекции 77
2.1.6 Методы статистической обработки результатов 80
2.2 Функциональные свойства АМП из тромбоцитов и кровяных пластинок животных 81
2.2.1 Спектр антимикробной активности кислотных экстрактов из тромбоцитов и кровяных пластинок животных 81
2.2.2 Влияние кислоторастворимых белков тромбоцитов и кровяных пластинок на персистентные свойства микроорганизмов 87
2.2.3 Оценка воздействия кислотных экстрактов из тромбоцитов и кровяных пластинок продуктивных животных на факторы вирулентности микроорганизмов 112
2.2.4 Характеристика антибиотикочувствительности микроорганизмов после соинкубирования с кислоторастворимыми белками тромбоцитов и кровяных пластинок 120
2.2.5 Влияние кислотных экстрактов тромбоцитов и кровяных пласти нок животных на чувствительность условно-патогенных микроорга низмов к антагонистически активным представителям нормальной микрофлоры 128
2.3 Разработка способа получения антимикробных пептидов из тромбоцитов курицы домашней (Gallus gallus) 137
2.4 Изучение биологических эффектов очищенных АМП из тромбоцитов курицы домашней и их механизмов в отношении микроорганизмов 144
2.4.1 Исследование механизма антибактериального действия фракций, выделенных из тромбоцитов G. gallus 144
2.4.1.1 Антимикробная активность пептидных фракций из тромбоцитов G. gallus 144
2.4.1.2 Флуоресцентная микроскопия и спектроскопия в оценке биологического действия антимикробных пептидов из тромбоцитов G. gallus 146
2.4.1.3 Биолюминесцентное тестирование 149
2.4.1.4 Изменение дзета-потенциала бактериальных клеток при воздействии антимикробных фракций из тромбоцитов курицы домашней 150
2.4.1.5 Морфофункциональная реакция микроорганизмов на воздействие антимикробных соединений из тромбоцитов курицы до машней 153
2.4.1.6 Изменение концентрации внеклеточных ионов калия при воздействии АМП 158
2.4.2 Исследование действия выделенных из тромбоцитов G. gallus пептидных фракций на биологические свойства микроорганизмов 160
2.4.2.1 Оценка воздействия АМП из тромбоцитов курицы домашней на персистентный потенциал микроорганизмов 160
2.4.2.2 Влияние АМП из тромбоцитов курицы домашней на факторы вирулентности микроорганизмов 163 2.4.2.3 Характеристика антибиотикочувствительности микроорганизмов после соинкубирования с АМП из тромбоцитов G. gallus 167
2.4.2.4 Влияние АМП тромбоцитов курицы домашней на чувствительность условно-патогенных микроорганизмов к антагонистически активным представителям нормальной микрофло ры 170
2.5 Биологические свойства энтерококков, выделенных от животных 175
2.5.1 Характеристика видового состава и факторов персистенции энтерококков, выделенных из клинического материала и фекалий продуктивных животных 175
2.5.2 Характеристика факторов патогенности энтерококков 183
2.5.3 Характеристика антибиотикорезистентности фекальных и клини ческих изолятов энтерококков 186
2.5.4 Разработка математической модели дифференциальной диагно стики клинически значимых штаммов энтерококков и представителей нормальной микрофлоры животных 193
2.5.5 Антагонистическая активность энтерококков in vitro и in vivo 200
III Обсуждение результатов исследований 209
Выводы 222
Рекомендации по использованию научных выводов... 224
Список сокращений 226
Библиографический список
