Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Микробиологический синтез органических кислот 8
1.2. Янтарная кислота, её характеристика и применение 16
1.3. Продуценты янтарной кислоты и условия их культивирования
1.3.1. Дрожжи-продуценты янтарной кислоты 22
1.3.2. Грибы-продуценты янтарной кислоты 25
1.3.3. Бактерии-продуценты янтарной кислоты 27
1.4. Механизмы биосинтеза янтарной кислоты 32
1.5. " Этанол, как субстрат для получения янтарной кислоты 35
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Объекты исследования 40
2.2. Культивирование дрожжей
2.2.1. Состав и подготовка основной среды 40
2.2.2. Подготовка посевного материала 40
2.2.3. Методы культивирования дрожжей 41
2.3. Метод получения янтарной кислоты из культуралыюй жидкости дрожжей Y. lipolytica
2.3.1. Сепарирование биомассы и получение пермеата культуральнои жидкости 43
2.3.2. Обработка пермеата перекисью водорода 43
2.3.3. Выделение целевого продукта 43
2.4. Аналитические методы 44
2.4.1. Методы контроля роста дрожжей 44
2.4.2. Определение концентрации этанола и аммонийного азота 45
2.4.3. Определение концентрации органических кислот 45
2.4.4. Определение концентрации изолимонной, а-кеїоглутаровой и янтарной 46 кислот энзиматическим методом
2.4.5. Определение содержания липидов
2.5. Определение активности ферментов 49
2.6. Методы определения выживаемости клеток Y. lipolytica 51
2.7. Биохимическая характеристика препарата янтарной кислоты
Глава 3. Результаты и обсуждениЕ
3.1. Биосинтез янтарной кислоты у дрожжей С. catenulata и С. zeylanoides 52
3.1.1. Скрининг дрожжей и отбор штаммов-продуцентов янтарной кислоты на среде с этанолом 55
3.1.2. Оптимизация условий культивирования и состава питательной среды для дрожжей С. catenulata и С. zeylanoides 57
3.1.2.1. Влияние концентрации сульфата аммония на рост дрожжей С. catenulata 57
3.1.2.2. Влияние концентрации этанола на рост дрожжей С. catenulata и С. zeylanoides 58
3.1.2.3. Влияние концентрации цинка на рост дрожжей С. catenulata и С. zeylanoides и накопление янтарной кислоты 60
3.1.2.4. Влияние аэрации на рост дрожжей С. catenulata и накопление янтарной кислоты 3.1.3. Динамика роста С. catenulata и С. zeylanoides и экскреция метаболитов 62
3.1.4. Динамика накопления запасных веществ у дрожжей С. catenulata и С. zeylanoides 66
3.1.5. Участие глиоксилатного цикла в биосинтезе янтарной кислоты из этанола 67
3.2. Метод получения янтарной кислоты с использованием дрожжей Y, lipolytica 72
3.2.1. Отбор продуцента и условия биосинтеза а-кстоглутаровой кислоты дрожжами 73
3.2.2. Реакция декарбоксилирования а-кетоглутаровой кислоты до янтарной кислоты в культуральной жидкости 79
3.2.3. Влияние перекиси водорода па выживаемость Y. lipolytica 212 и количество образуемой янтарной кислоты из а-кетоглутаровой кислоты 80
3.2.4. Культивирование дрожжей Y. lipolytica 212 в присутствии перекиси водорода 82
3.2.5. Культивирование дрожжей Y. lipolytica в ферментере с целью наработки янтарной кислоты
3.3. Выделение ЯК из культуральной жидкости дрожжей Y. lipolytica 85
3.4. Биохимическая характеристика препарата янтарной кислоты 89
Глава 4. Заключение 92
Выводы 95
Список литературы
