Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1 Физиологическая роль фибробластов 14
1.1.1 Спонтанная и реактивная секреция биологически активных компонентов фибробластами 14
1.1.2 Возраст-зависимые изменения функциональной активности фибробластов 17
1.1.3 Особенности дермальных фибробластов 21
1.2 Функциональная активность интестинальных фибробластов при локальном воспалении в кишечнике 24
1.2.1 Особенности функционирования иммунной системы при хроническом воспалении кишечника (болезни Крона и язвенном колите) 24
1.2.2 Особенности функционирования интестинальных фибробластов при локальном воспалении в кишечнике 27
1.3 Иммуномодулирующее действие липополисахарида. 30
1.4 Биомедицинские клеточные продукты для терапии воспалительных заболеваний кишечника 33
1.5 Заключение по обзору литературы 35
Глава 2. Объект и методы исследования 38
2.1 Объект исследования 38
2.2 Схема экспериментов in vitro 39
2.3 Выделение и культивирование дермальных фибробластов 41
2.4 Морфологические исследования, подсчёт и оценка жизнеспособности культивируемых клеток 42
2.5 Клоногенный анализ 43
2.6 Определение времени удвоения популяции фибробластов 44
2.7 Иммунофенотипирование клеток 44
2.8 Исключение микробной и вирусной контаминации 45
2.8.1 Полимеразная цепная реакция 45
2.8.2 Микробиологический посев на стерильность 45
2.9 Иммуноферментный анализ секретома дермальных фибробластов 46
2.10 Иммуноблоттинг 46
2.11 Вызванная секреторная активность дермальных фибробластов 47
2.12 Статистическая обработка результатов 48
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 49
3.1 Морфология, клоногенный потенциал и антигенный фенотип дермальных фибробластов детей подросткового возраста в норме и при локальном воспалении в кишечнике 49
3.1.1 Морфология дермальных фибробластов 49
3.1.2 Клоногенный потенциал дермальных фибробластов 53
3.1.3 Жизнеспособность дермальных фибробластов 62
3.1.4 Антигенный фенотип дермальных фибробластов 62
3.1.5 Контаминация. 66
3.2 Функциональная характеристика дермальных фибробластов здоровых детей и с воспалительными заболеваниями кишечника 66
3.2.1 Содержание про- и противовоспалительных цитокинов в сыворотке крови и супернатанте дермальных фибробластов детей 66
3.2.2 Спонтанная секреция дермальными фибробластами ростовых факторов 72
3.2.3 Спонтанная продукция дермальными фибробластами растворимых компонентов внеклеточного матрикса (макромолекул коллагена IV типа, фибронектин) 77
3.2.4 Влияние различных сроков культивирования на стабильность секретома дермальных фибробластов 83
3.3 Индуцированная секреция дермальных фибробластов 83
3.4 Обсуждение полученных результатов 85
Заключение 105
Выводы 107
Список сокращений 109
Список литературы 112
Приложение 142
