Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 9
1.1.1. История открытия лимфом Бёркитта 9
1.1.2. Патоморфологическая характеристика лимфом Бёркитта 14
1.1.3. Клеточные линии лимфом Бёркитта 19
1.2. Апоптоз: процесс естественной гибели клеток 24
1.2.1. История открытия клеточной гибели 25
1.2.2. Морфология клеточной гибели 26
1.2.3. Молекулярные механизмы апоптоза 29
1.2.4. Удаление клеточных остатков 32
1.2.5. Типы клеточной гибели 34
1.2.6. Программируемая клеточная гибель в эволюционном аспекте 37
1.3. Апоптоз и РАК 40
1.3.1. Апоптотический парадокс раковых клеток 40
1.3.2. Устойчивость к апоптозу 42
ГЛАВА II. Материалы и методы 44
2.1. Клеточные линии 44
2.2. Молекулярно-цитогенетические методы 44
2.2.1. Мультиплексная Количественная Флуоресцентная Полимеразная Цепная Реакция 44
2.2.2. Приготовление препаратов митотических хромосом из опухолевых клеток 50
2.2.3. Спектральное Кариотипирование 51
2.2.4. Сравнительная Геномная Гибридизация 51
2.2.5. Флуоресцентная гибридизация in situ 57
2.2.6. Анализ конденсации клеточных ядер 58
2.3. Условия индукции апоптоза опухолевых клеток 58
2.4. Методы проточной цитометрии 59
2.4.1. Анализ содержания ДНК 59
2.4.2. Анализ активации каспазы -3 60
2.4.3. Анализ презентации фосфатидилсерина на поверхности клеток... 60
2.4.4. Анализ фронтального светорассеяния клеток 61
2.5. Методы работы с белками 61
2.5.1. Анализ энзиматической активности каспаз -3 и -7 61
2.5.2. Иммуноблоттинг (Вестерн-блот анализ) 62
2.6. Методы статистической обработки 64
ГЛАВА III. Результаты 65
3.1. Анализ полиморфных маркеров с помощью метода мультиплексной количественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции (QF-ПЦР) 65
3.2. Получение полных кариотипов одиннадцати в-клеточных линий 68
3.2.1. Спектральное кариотипирование 68
3.2.2. Сравнительная геномная гибридизация 74
3.2.3. Флуоресцентная гибридизация in situ 79
3.3. Определение степени химиочувствительности одиннадцати в-клеточных линий 81
3.4. Определение характера воздействия на клетки экспериментального противоракового соединения - бетулиновой кислоты (БК) 85
3.4.1. Анализ презентации фосфатидилсерина на поверхности клеток одиннадцати В-клеточных линий 86
3.4.2. Анализ фронтального светорассеяния клеток одиннадцати В-клеточных линий 86
3.4.3. Анализ энзиматической активности каспаз -3 и-7 в клеточных лизатах одиннадцати В-клеточных линий 89
3.4.4. Анализ морфологических изменений клеточных ядер в одиннадцати В-клеточных линиях 96
3.5. Определение уровня экспрессии белков-ингибиторов апоптоза в одиннадцати в-клеточных линий 99
ГЛАВА IV. Обсуждение 102
4.1. Молекулярно-цитогенетические особенности одиннадцати в-клеточных линий 102
4.2. Устойчивость к апоптозу в одиннадцати в-клеточных линий 107
Выводы 111
Список литературы
