Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Гемоглобины: разнообразие и функции 10
1.1.1. Классификация гемоглобинов 10
1.1.2. Гемоглобины как кислородзависимые регуляторы метаболизма оксида азота 11
1.1.3. Мембраносвязанный гемоглобин эритроцитов 17
1.1.3.1. Физиологическая роль мембраносвязанного гемоглобина 17
1.1.3.2. Потенциальное использование мембраносвязанного гемоглобина в клинико-биохимической диагностике 24
1.2. Карбонильный стресс в биологических системах 26
1.2.1. Понятие карбонильного стресса 26
1.2.2. Способы защиты от карбонильного стресса 30
1.2.3. Методические подходы, применяемые для изучения карбонильного стресса 32
1.2.4. Карбонильный стресс в эритроцитах 34
1.2.4.1. Пути возникновения карбонильного стресса в эритроцитах 34
1.2.4.2. Роль гемоглобина в развитии последствий карбонильного стресса 38
1.3. Адсорбционный механизм регуляции клеточного метаболизма 39
1.4. Компьютерные экспертные системы в медицинской диагностике 43
1.4.1. Понятие об экспертной системе 43
1.4.2. Методы анализа данных в экспертных системах 45
ГЛАВА 2. Материалы и методы 47
2.1. Материалы 47
2.2. Методы 48
2.2.1.Определение концентрации гемоглобина и его разных форм 48
2.2.2. Эксперименты с суспензией эритроцитов 49
2.2.3. Реакционная система для изучения нитрозилирования гемопротеидов 50
2.2.4. Реакционная система для изучения влияния доноров NO и метилглиоксаля на переход гемоглобина в связанное с мембранами состояние 50
2.2.5. Получение гликированного гемоглобина 51
2.2.6. Определение флуоресцирующих продуктов неферментативного гликирования гемоглобина 51
2.2.7. Восстановление дифенилтетразолий бромида 51
2.2.8. Распад нитрозоглутатиона 51
2.2.9. Определение SH-групп в низкомолекулярных и белковых тиолах 52
2.2.10. Определение пероксинитрита 52
2.2.11. Измерение антиоксидантной активности ДНКЖ 52
2.2.12. Регистрация спектров оптического поглощения 53
2.2.13. Регистрация спектров ЭПР 53
2.2.14. SDS-электрофорез в ПААГ 53
2.2.15. Методы статистического анализа данных для построения экспертной системы 54
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 56
3.1. Влияние метаболитов оксида азота на реакцию неферментативного гликирования (реакцию Майяра) 56
3.1.1. Ингибирование образования флуоресцирующих продуктов неферментативного гликирования донорами оксида азота 56
3.1.2. Образование динитрозильных комплексов железа с продуктами модификации гемоглобина и карнозина метилглиоксалем 60
3.2. Нитрозилирование и нитрование гемоглобина в условиях, моделирующих реакцию Майяра 68
3.2.1. Взаимодействие нитрозоглутатиона с гемоглобином в присутствии метилглиоксаля 68
3.2.2. Образование нитригемоглобина в системе, содержащей метилглиоксаль 79
3.3. Переход гемоглобина из растворимого в мембраносвязанное состояние в условиях различных видов стресса 86
3.3.1. Разработка методики определения мембраносвязанного гемоглобина 86
3.3.2. Взаимосвязь между уровнем мембраносвязанного гемоглобина и устойчивостью эритроцитов 90
3.3.3. Стабилизирующее действие глутатионовых ДНКЖ на эритроциты 97
3.3.4. Влияние метаболитов оксида азота на переход гемоглобина в мембраносвязанное состояние в условиях карбонильного стресса 102
3.4. Создание компьютерной экспертной системы для диагностики анемий 115
Заключение 121
Выводы 123
Благодарности
