Введение
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10
1.1. Влияние экзогенных факторов на стабильность мРНК растений 10
1.2. Факторы, определяющие селективную деградацию мРНК 17
1.2.1. Цис-элементы стабильности мРНК 17
1.2.2. Транс-факторы, участвующие в регуляции распада мРНК 25
1.2.3. Пути деградации мРНК в растительной клетке 33
1.3. Посттранскрипционное "молчание" генов и РНК интерференция 39
1.4. Методические подходы к изучению деградации мРНК 44
1.4.1. Методы определения содержания специфических мРНК 44
1.4.2. Методы оценки стабильности мРНК 48
1.4.3. Применение технологий массового анализа экспрессии генов для изучения стабильности мРНК 54
1.5. Анализ литературных данных о распаде мРНК эукариот в
высокоочищенных препаратах (in vitro) 56
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 64
2.1. Подготовка растительного материала 64
2.2. Выделение суммарной РНК 65
2.3. Обработка мРНК целитом 66
2.4. Аффинная хроматография мРНК на поли(У)-сефарозе 66
2.5. Термальная хроматография поли(А)мРНК на поли(У)-сефарозе 67
2.6. Радиоактивное мечение дезоксирибонуклеотидных зондов 67
2.7. Гибридизация дезоксирибонуклеотидных зондов с поли(А)мРНК на колонке поли(У)-сефарозы 68
2.8. Гибридизация дезоксирибонуклеотидных зондов с мРНК
в растворе 69
2.9. Синтез кДНК и полимеразная цепная реакция 70
2.10. Электрофоретический анализ РНК и ДНК 71
2.11. Статистическая обработка результатов 72
2.12. Использованные реактивы 72
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 73
3.1. Сравнение закономерностей деградации мРНК злаков in vivo и in vitro 73
3.2. Влияние света и температуры выращивания на стабильность мРНК пшеницы и ячменя 92
3.3. Изменение стабильности мРНК пшеницы и ячменя под действием стрессов 99
3.4. Влияние биологически активных веществ на стабильность мРНК пшеницы 114
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 120
ВЫВОДЫ 126
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 128
