Введение
1. Введение 12
2. Строение и функции нейтрофилов 15
3. Фагоцитоз и уничтожение фагоцитированных бактерий нейтрофилами
4. Гранулы и бактерицидные агенты нейтрофилов
5. Адгезионные рецепторы нейтрофилов и регуляция адгезии нейтрофилов к стенкам сосудов
6. Вытягивание мембранных цилиндров из тела нейтрофилов и их слущивание под действием потока.
7. Вытягивание мембранных цилиндров из тела нейтрофилов под действием локально приложенной силы
8. «Экстраклеточные уздечки» нейтрофилов 29
9. Микровезикулы и эктосомы, секретируемые нейтрофилами 31
10.Адгезионные взаимодействия клеток и внутриклеточный рН 33
11.Образование цитонем в эмбриональных клетках, клетках крови и других клетках эукариот
12.Роль метаболизма глюкозы и АТФаз вакуолярного типа в 39
процессах слияния/разделения клеточных мембран
13.Роль актинового цитоскелета в образовании цитонем в 44
нейтрофилах человека и в других клетках
14.Окись азота как физиологический регулятор образования цитонем в нейтрофилах
15.Синтез NO как точка приложения факторов, ответственных за тубуляцию/везикуляцию мембран
16.Паразитические простейшие индуцируют образование в нейтрофилах тубулярных филоподий, способных связывать паразитов 52
17.Цитонемы паразитических простейших 53
18.Перспективы дальнейшего изучения цитонем
19.Цитонемы бактерий 55
20.Мембранные тубовезикулярные структуры, создаваемые бактериями или паразитическими простейшими внутри клетки хозяина
21.Перспективы дальнейшего изучения цитонем
Материалы и методы 61
1. Материалы 61
2. Клетки 62
3. Бактерии 63
4. Адгезия нейтрофилов к субстрату 64
5. Количественная оценка числа прикрепившихся нейтрофилов 65
6. Определение рецепторов, вовлеченных в адгезию нейтрофилов 65
7. Измерение степени распластывания клеток 67
8. Оценка жизнеспособности нейтрофилов 66
9. Измерение внутриклеточного рН 66
10.Взаимодействие нейтрофилов с бактериями 67
11.Опсонизация зимозана и бактерий 68
12.Флуоресцентная микроскопия 68
13.Сканирующая электронная микроскопия 68
14.Трансмиссионная электронная микроскопия 69
15.Определение белкового состава цитонем 69
16.Концентрирование белков 70
17.Электрофорез белков в полиакриламидном геле 71
18. Триптический гидролиз белка в полиакриламидном геле 71
19.Подготовка образцов для масс-спектрометрии 71
20.Получение масс-спектров 72
21.Идентификация белков по «пептидному фингерпринту» 72
22.Хроматография высокого разрешения 72
23.Масс-спектрометрическое определение дефензинов 72
24.Определение бактерицидной активности продуктов, содержащихся в цитонемах
25.Статистическая обработка результатов 74
Результаты
1. Влияние окиси азота, супероксиданионрадикалов и 75 пероксинитрита на адгезию нейтрофилов человека к монослою клеток эндотелия человека
2. Изучение механизмов адгезии нейтрофилов человека к твердому субстрату, покрытому белками экстраклеточного матрикса
3. Влияние межклеточной адгезии нейтрофилов и фибробластов человека на величину внутриклеточного рН клеток
4. Выявление метаболических процессов, регулирующих внутриклеточный рН и образование цитонем при адгезии нейтрофилов к фибронектину
5. Выявление ионообменных процессов, контролирующих внутриклеточный рН и морфологию нейтрофилов при адгезии к фибронектину
6. Роль деполимеризации актинового цитоскелета в образовании мембранных тубуловезикулярных структур нейтрофилов
7. Роль NO в адгезионных взаимодействия нейтрофилов с клетками, дрожжами и бактериями
8. Изучение механизма связывания бактерий цитонемами нейтрофилов человека
9. Протеомный анализ состава цитонем 143
10. Доказательство мембранной природы тубулярных структур, 159 связывающих бактерии с клетками эукариот и с другими бактериями в биопленках
11. Обсуждение результатов 172
12. Выводы 180
13. Список цитируемой литературы 181
