Введение
1. Генетическая иммунизация 11
2. ДНК-иммунизация при герпетических инфекциях 19
2.1 Классификация герпесвирусов 20
2.2 Пути передачи ВПГ 22
2.3 Строение ВПГ 23
2.4 Взаимодействие вирусас клеткой 23
2.5 Иммунный ответ при герпетической инфекции 26
2.6 Современные вакцины против ВПГ 30
2.6.1 Инактивированные вакцины ..30
2.6.2 Субъединичные вакцины 32
2.6.3 Живые аттенуированные, генноинженерные вакцины 33
2.7 ДНК-вакцины против ВПГ-инфекции 34
2.8 Адъюванты для ДНК-вакцин 36
3. ГМ-КСФ и ФНО как потенциальные адъюванты для ДНК-вакцин 40
3.1 ГМ-КСФ (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор) 40
3.2 Фактор некроза опухоли (ФНО) 42
4. Отечественные иммуномодуляторы нового поколения 45
4.1 Глюкозаминил-мурамилдипептид (ГМД11) 45
4.2 Гепон 47
5 Собственные исследования 50
5.1 Получение гибридом, продуцирующих МКА к белкам ВПГ 1 50
5.1.1 Иммунизация 50
5.1.2 Миеломная клеточная линия 50
5.1.3 Культивирование клеток 50
5.1.4 Слияние клеток и выращивание гибридом 50
5.1.5 Криоконсервирование гибридом 51
5.1.6 Получение асцитных жидкостей, содержащих МК 52
5.1.7 Получение МКА из асцитных жидкостей 52
5.1.8 Определение концентрации белка 52
5.1.9 Субтипирование МКА 52
5.1.10 Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) 52
5.1.11 Непрямой иммунофлюоресцентный анализ (нИФ) 52
5.2. Животные 53
5.3. Вирус и клетки 53
5.4. Определение летальной дозы ВПГ1 53
5.5. Иммуноген (плазмида pDNAgD) 54
5.6. Выделение рекомбинантного фактора некроза опухоли мышей (мФНОа) 54
5.7. Конструирование плазмиды для эукариотической экспрессии гена мышиного TNFa 54
5.8. Конструирование плазмиды для эукариротическои экспрессии гена мышиного гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (pDNAGM-CSF) 55
5.9. Трансфекция in vitro 56
5.10. ДНК-иммунизация 57
5.11. Изучение активности антител к ВПГ1 57
5.12. Реакция нейтрализации 57
5.13. Определение ВПГ-специфических иммуноглобулинов класса IgGl и IgG2a 58
5.14. Определение количества CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов 58
5.15. Определение пролиферативного ответа Т-лимфоцитов 58
5.16. Активность интерферона (ИФа) 59
5.17. Протективный ответ 59
6. Получение и характеристика МКА кВПГ 60
6.1 Слияние и скрининг гибридом 60
6.2 Характеристика МКА 61
6.2.1. Активность МКА в реакции нИФ 61
6.2.2. Активность МКА в реакции ИФА 61
6.2.3- Субтипирование Ig, представляющих МКА 61
6.2.4. Способность МКА подавлять инфекционную активность ВПГ в реакции нейтрализации 62
7. Определение летальной дозы ВПГ 63
8. Трансфекция in vitro 63
9. Генетическая иммунизация in vivo 63
9.1. Изучение динамики клеточного и гуморального иммунного ответов на введение плазмиды pDNAgD, содержащей ген gD ВПГ 1 63
9.2. Исследование действия ФНО на иммунный ответ при иммунизации животных pDNAgD 74
9.3. Исследование адъювантного действия ГМ-КСФ на ДНК-иммунизацию мышей против герпетической инфекции 83
9.4. Влияние ГМДП на иммунный ответ при ДНК-иммунизации против вируса простого герпеса 87
9.5. Исследование адъювантного действия препарата Гепон на ДНК- иммунизацию животных против ВПГ-инфекции 93
Обсуждение результатов исследований 99
