Введение
I. Обзор литературы 11
1.1. Амниотическая жидкость: происхождение, функции, состав 11
1.2. Общая характеристика клеток амниотической жидкости 12
1.3. Стволовые клетки из амниотической жидкости 14
1.4. Потенции стволовых клеток амниотической жидкости к дифференцировке in vitro
1.4.1. Остеогенная дифференцировка 17
1.4.2. Адипогенная дифференцировка 20
1.4.3. Хондрогенная дифференцировка 21
1.4.4. Миогенная дифференцировка 22
1.4.5. Дифференцировка в кардиомиоциты 23
1.4.6. Дифференцировка в эндотелиальные клетки 24
1.4.7. Кроветворные клетки 25
1.4.8. Дифференцировка в гепатоциты 26
1.4.9. Дифференцировка в р-клетки поджелудочной железы 27
1.4.10. Нейральная дифференцировка 28
1.5. Трансплантация стволовых клеток амниотической жидкости без
предварительной дифференцировки in vitro 30
1.5.1. Мечение клеток перед трансплантацией 30
1.5.2. Интеграция клеток в ткани почки 31
1.5.3. Интеграция и дифференцировка в клетки эпителия легкого 32
1.5.4. Интеграция СК АЖ в ткани кишечника 32
1.5.5. Интеграция СК АЖ в ткани печени 33
1.5.6. Трансплантация СК АЖ при инфаркте миокарда 33
1.5.7. Трансплантация СК АЖ и мионекроз 35
1.5.8. Трансплантация СК АЖ при повреждении периферических нервов
1.6. Получение индуцированных плюрипотентных клеток из стволовых клеток амниотическои жидкости 36
II. Материалы и методы 39
II. 1. Культивирование клеток из амниотическои жидкости 39
II.2. Сканирующая-электронная микроскопия 40
II.З. Проточная цитофлуориметрия 40
II.4. Иммуноцитохимия 41
II.5. ОТ-ПЦР 43
II.6. Клонирование стволовых клеток амниотическои жидкости 44
ІI.7. Индукция дифференцировок стволовых клеток амниотическои жидкости 46
II.7.1. Индукция остеогенеза 46
II.7.2. Индукция адипогенеза 47
ІІ.7.3. Индукция миогенеза 47 ЇЇ.7.4. Дифференцировка в гепатоциты 47
II.7.5. Дифференцировка в эпидермальные клетки 48
II.8. Культивирование стволовых клеток амниотическои жидкости в трехмерном коллагеновом матриксе 48
II.8.1. Выделение коллагена изхвостов крыс 48
II.8.2 Приготовление коллагенового геля 49
II.8.3. Включение BrdU 49
11.8.4: Электронно-микроскопическое исследование СК АЖ, культивированных в коллагеновом геле 50
II.9. Индукция экспрессии в стволовых клетках амниотическои жидкости молекул главного комплекса гистосовместимости интерфероном-у 51
II. 10. Трансплантация стволовых клеток амниотическои жидкости иммунодефицитным животным 51
III. Результаты исследования 53
III. 1. Культивирование клеток из амниотическои жидкости 53
III.2. Сканирующая электронная микроскопия 55
III.З. Характеристика фенотипа по экспрессии молекулярных маркеров. 56
III.3.1. Иммуноцитохимический анализ 56 III.3.2. Проточная цитофлуориметрия 60
III.3.3. Двойное иммуноцитохимическое окрашивание 63
III.3.4. ОТ-ПЦР 63
III.4. Дифференцировка стволовых клеток амниотической жидкости 65
III.4.1. Остеогенная дифференцировка 65
111.4.2. Адипогенная дифференцировка 67
111.4.3. Эпидермальная дифференцировка 68
III.5. Трансплантация стволовых клеток амниотической жидкости иммунодефицитным животным 69
111.6. Клонирование стволовых клеток амниотической жидкости 71
III.6.1. Морфологическая характеристика клонированных клеток 71
III.6.2. Иммуноцитохимический анализ клонированных клеток 74
III.6.3. Дифференцировка клонированных клеток 75
III.6.3.1 Остеогенная дифференцировка 75
III.6.3.2. Миогенез 76
IIL6.3-.3. Дифференцировка в гепатоциты 77
111.7. Стволовые клетки амниотической жидкости в трехмерном коллагеновом матриксе ! 78
III. 7.1. Культивирование СК АЖ в коллагеновом геле 79
III.7.2. Электронно-микроскопическое исследование СК АЖ, культивированных в геле 81
III.7.3. Иммуноцитохимический анализ СК АЖ, культивированных в геле 82
111.8. Актиновые микрофиламенты в стволовых клетках амниотической жидкости 84
111.9. Индукция интерфероном-у 85
IV. Обсуждение 87
Заключение 104
Выводы 107
Список литературы 108
