Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1. Теоретико-экспериментальные аспекты изучения эпигенных систем 9
1.2. Генные сети 13
1.2.1. Конструирование искусственных генных сетей 15
1.2.2. Организация генной регуляторной сети Е. coli 16
1.2.3. Функционально-генетическая изменчивость генных сетей 21
1.3. Физиолого-генетические механизмы адаптивной изменчивости 24
1.3.1. Системы ответа бактериальных клеток на стресс 26
1.3.2. Системы программируемой клеточной смерти у прокариот 29
1.3.3. Система коллективного выживания у бактерий 33
1.4. Молекулярные механизмы адаптивного мутагенеза прокариот 35
1.4.1. Точковые мутации, как результат адаптивной изменчивости 37
1.4.2. Адаптивные изменения в структурно-функциональной организации хромосом 39
1.4.3. Закрепление результатов адаптивного мутагенеза в эволюции 41
1.4.4. Адаптивные механизмы преодоления межвидовых генетических барьеров 43
ГЛАВА 2. Объект и методы исследования 47
2.1. Объект исследования 47
2.2. Среда и условия роста 47
2.3. Выявление клеток, синтезирующих Р-галактозидазу 47
2.4. Определение относительной концентрации белка GFP в клетках 49
2.5. Выделение и очистка плазмидной ДНК 49
2.6. Трансформация клеток E.coli 50
2.7. Гидролиз ДНК эндонуклеазами рестрикции 51
2.8. Лигирование фрагментов ДНК 51
2.9. Расщепление одноцепочечных участков ДНК нуклеазой S1 52
2.8. Электрофорез в агарозном геле 52
2.9. Извлечение ДНК из легкоплавкой агарозы 53
2.10. Статистический анализ 53
2.11. Штаммы E.coli и плазмиды 53
2.12. Ферменты 54
2.13. Реактивы 54
ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение 55
3.1. Конструирование плазмидных циклических дигенных сетей с отрицательными обратными связями 55
3.2. Изучение функциональной активности циклических дигенных систем путем рассева до единичных колоний 63
3.3. Экспериментальное моделирование дупликаций, изменяющих функциональную активность циклической дигенной системы 78
3.4. Влияние аминокислотного голодания на работу циклической дигенной системы 84
Заключение 89
Выводы 91
Список литературы
