Введение
Глава 2. Литературный обзор II
2.1. Устойчивые к антиметаболитам мутанты культивируемых клеток в решении проблем генетики соматических клеток II
2.1.1. Актуальность проблемы II
2.1.2. Мутанты, устойчивые к ядам II
2.2. Шожественно-измененный фенотип клеток с мембранно-обусловленной устойчивостью . 14
2.2.1. Мембранные мутанты 14
2.2.2. Изменение состава белков устойчивых клеток 18
2.2.3. Коллатеральная чувствительность и холодочувствительность клеток с множественной устойчивостью 20
2.2.4. Признаки трансформированного фенотипа в клетках с множественной устойчивостью 22
2.2.5. Характер наследования признака множественной устойчивости * 23
2.3. Высокий уровень устойчивости к анти метаболитам и амплификация генов 25
2.3.1. Амплификация генов у эукариот 25
2.3.2. Устойчивость, амплификация генов и цитологическая картина явления 27
2.3.3. Множественная устойчивость к ядам и амплификация генов 28
2.3.4. Стабильная и нестабильная амплификация 30
Глава 3. Материалы и методы
3.1. Клеточные линии и клоны. Условия культивирования 31
3.2. Селекция устойчивых к колхицину клонов . 32
3.3. Индукция мутагеном повышенной частоты появления устойчивых вариантов 32
3.4. Изучение стабильности сохранения признака . 32
3.5. Повышающая селекция 33
3.6. Особенности размножения клеток: скорость роста, насыщающая плотность и зависимость от сыворотки 33
3.7. Определение перекрестной устойчивости . 34
3.8. Потенциирование мембранной проницаемости твином 80 34
3.9. Накопление клетками -колхицина 35
3.10. Определение чувствительности клеток к вирусу везикулярного стоматита (ВВС) . 35
3.11. Онкогенность клеток . 36
3.12. Гистологическое исследование опухолей . 36
3.13. Гибридизация 36
3.14. Определение уровня устойчивости к колхицину в гибридных клонах 37
3.15. Трансформация чувствительных к колхицину клеток с помощью ДНК устойчивых клеток . 37
3.16. Кариологический анализ 38
Глава 4. Результаты 40
4.1. Селекция устойчивых к колхицину клонов . 40
4.1.1. Селекция устойчивых клонов и повышение частоты их появления мутагеном 40
4.1.2. Различная степень стабильности устойчивых к колхицину клонов первого шага селекции . 40
4.1.3. Повышающая селекция 44
4.2. Характеристика фенотипических особенностей устойчивых к колхицину клеток 44
4.2.1. Особенности размножения 44
4.2.2. Перекрестная устойчивость
резистентных клеток 47
4.2.3. Потенциирование чувствительности к колхицину твином 80 47
4.2.4. Накопление 3Н-колхицина клетками 51
4.2.5. Чувствительность к вирусу везикулярного стоматита 51
4.2.6. Онкогенность клеток МГХШа и колхицин-устойчивых клонов 51
4.2.7. Морфология опухолей 53
4.3. Стабильное и кодоминантное наследование признака устойчивости 55
4.3.1. Стабильное наследование устойчивости к колхицину в высокорезистентных клонах Г-ІОІ, Г-40І и Г-І20 55
4.3.2. Кодоминантность наследования резистентности в гибридах 57
4.3.3. Перенос признака устойчивости к колхицину из устойчивых клеток в чувствительные с помощью ДНК 60
4.4. Цитогенетическая характеристика 62
Глава 5. Обсуждение 65
5.1. Генетическая природа и различная степень стабильности признака устойчивости в изученных клонах 65
5.2. Фенотипические особенности устойчивых к колхицину клонов 66
5.2.1. Измененная проницаемость мембраны как механизм устойчивости к колхицину 66
5.2.2. Особенности трансформированного фенотипа устойчивых клеток 67
5.2.3. Сниженная чувствительность к вирусу 70
5.3. Стабильное и кодоминантное наследование признака устойчивости в высокорезистентных клонах 71
5.3.1. Стабильность устойчивости высокорезистентных клонов 71
5.3.2. Кодоминантное наследование признака устойчивости 73
5.4. Цитогенетическая характеристика устойчивых клонов 75
Заключение 78
Выводы 80
Литература
