Введение
I. Обзор литературы 12-56
1.1. Характеристика вируса классической чумы свиней 12-29
1.1.1 Морфология и физические свойства 12-16
1.1.2 Классификация 16
1.1.3 Патогенез и патология 16-20
1.1.4 Культивирование 20-21
1.1.5 Эпизоотология 21-24
1.1.6 Иммунитет и вакцинация 24-25
1.1.7 Меры борьбы и профилактики 25-27
1.1.8 Диагностика 27-29
1.2 Характеристика вируса репродуктивно респираторного синдрома свиней - 30-47
1.2.1 Морфология и физические свойства 32-36
1.2.2 Классификация 36
1.2.3 Патогенез и патология 36-39
1.2.4 Культивирование 39
1.2.5 Эпизоотология 40-41
1.2.6 Иммунитет 41
1.2.7 Меры борьбы и профилактики 41-45
1.2.8 Диагностика . ( 45-47
1.3 Филогенетический анализ 47-54
1.3.1 Генетическая вариабельность и классификация изолятов вируса КЧС 48-51
1.3.2 Генетическая вариабельность и классификация изолятов вируса РРСС 51-54
1.4 Заключение по литературному обзору 55-56
II. Материалы и методы исследования 57-68
2.1 Материалы 57-61
2.1.1 Штаммы и изоляты вирусов КЧС и РРСС и культуры 57-58 клеток
2.1.2 Химические реагенты 59
2.1.3 Реагенты и наборы для молекулярной биологии 59-60
2.1.4 Оборудование 60-61
2.2 Методы I 61-
2.2.1 Культивирование 61
2.2.2 Выделение РНК из культуры клеток 61 -63
2.2.3 Проведение ОТ-ПЦР 63-66
2.2.4 Электрофорез ДНК в агарозном геле 66
2.2.5 Очистка ПЦР-фрагментов при помощи набора дляочистки ПЦР-продуктов (Promega).. 66
2.2.6 Подготовка ПЦР-фрагментов для секвенированияметодом гель-электрофореза и очистки при помощи наборов для выделения из геля (Prbmega и QIAGEN). 66
2.2.7 Подготовка ПЦР-фрагментов для секвенирования методом очистки в агарозном геле при помощи Nal 66-61
2.2.8 Рестрикция 67
2.2.8 Определение первичных нуклеотидныхпоследовательностей 67-68
2.2.9 Компьютерный анализ полученных первичныхнуклеотидных последовательностей и построение филогенетических дендрограмм 68
III. Результаты 69-89
3.1 Разработка метода дифференциации вакцинного и вирулентных (полевых) штаммов вируса КЧС 69-73
3.1.1 Результаты сравнительного рестриктазного I картирования генома вакцинного штамма КС 70-71
3.1.2 Идентификация вакцинного штамма КС и его дифференциация от референтных штаммов и полевых изолятов71-73
3.2 Филогенетическая характеристика полевых изолятов вируса КЧС, циркулирующих на территории России, и сравнение их со штаммом КС 73-80
3.2.1 Филогенетическая характеристика вакцинного штамма КС вируса КЧС
3.2.2 Филогенетическая характеристика российских полевых изолятов вируса КЧС 74-80
3.3 Разработка метода выявления генома вируса РРСС помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с 80-84
3.4 Изучение распространения вируса РРСС на территории России и Белоруссии при помощи метода ОТ-ПЦР с дифференцирующей системой праймеров 85-87
3.5 Филогенетическая характеристика полевых изолятов вируса РРСС, циркулирующих на территории России и Белоруссии 87-89
Обсуждение 90-101
Выводы 102
Список литературы 104-121
