ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ ..................................................................................................................................... 7
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .......................................................................................... 14
1.1 Применение растительных компонентов в разработке пищевых и фармацевтических продуктов. ............................................................................................................. 14
1.2. БАВ растительного происхождения – перспективные лекарственные кандидаты в регуляции метаболических нарушений.................................................................... 18
1.3. Сельдерей пахучий – перспективный источник БАВ для разработки функциональных продуктов и лекарственных средств ................................................................ 32
1.3.1 Ботаническая характеристика и сырьевая база Apium graveolens L. ....................... 32
1.3.2 Фитохимический состав и фармакологическая активность сырья сельдерея пахучего........................................................................................................................................................ 33
1.4. ВЭЖХ – один из основных методов анализа растительных БАВ ........................... 41
Выводы к главе 1 ......................................................................................................................... 46
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ............................................ 48
2.1 Объекты исследования ........................................................................................................ 48
2.2 Предварительный фитохимический скрининг сырья сельдерея пахучего .......... 50
2.2.1. Анализ фенольного профиля ботанических форм и сортов сельдерея пахучего методами ВЭТСХ и УФ-спектрофотомерии ......................................................................................... 50
2.2.1.1. ВЭТСХ-анализ фенольных кислот в ботанических формах сельдерея листового 50
2.2.1.2. Количественное определение суммы фенолкарбоновых кислот методом УФ-спектрофотомерии в ботанических формах сельдерея листового. ................................................. 50
2.2.1.3. Количественное определение суммы флавоноидов методом УФ-спектрофотомерии в сортах сельдерея листового. ........................................................................... 51
2.2.2. Анализ минерального состава сырья сельдерея методом АЭС-ИСП. ................ 52
2.2.3. Выделение и анализ полисахаридных фракций ботанических форм Apium graveolens L................................................................................................................................................. 53
2.2.3.1. Выделение и очистка ....................................................................................................... 53
2.2.3.1. Изучение структурных характеристик полисахаридных фракций ........................ 55
3
2.2.3.4. Определение молекулярно-массового распределения фракций ВРПС и ПВ корнеплодов сельдерея ............................................................................................................................... 57
2.2.4. Анализ липофильных фракций ботанических форм Apium graveolens L методом ГХ/МС ......................................................................................................................................................... 57
2.2.5. Количественный анализ содержания сенкиунолида А в липофильной фракции сельдерея пахучего. .................................................................................................................................... 58
2.3. Разработка и проведение валидационных испытаний ВЭЖХ-методик количественного определения фенольных соединений в сырье сельдерея пахучего ........... 59
2.3.1. Разработка и валидация методики количественного определения хлорогеновой кислоты в сырье сельдерея листового для оценки сортовых преимуществ сырья........................ 59
2.3.2. Подбор хроматографических условий для анализа кумаринов ................................... 60
2.4. Разработка фитосубстанций на основе сырья сельдерея пахучего и предпосылки для их изучения и последующего использования. .......................................................................... 60
2.4.1 Анализ структуры предложения и объемов продаж БАД, содержащих полисахариды природного происхождения ..................................................................................................................... 60
2.4.2 Исследование приверженности целевой аудитории к использованию продуктов функционального и специализированного питания .............................................................................. 61
2.4.3. Модификация методики выделения ВРПС и ПВ корнеплодов сельдерея пахучего.. 62
2.4.4. Выбор показателей качества и разработка проекта ТУ фитосубстанции на основе ВРПС и ПВ сельдерея корневого ............................................................................................................. 62
2.4.5. Изучение фармакологической активности фитосубстанций ВРПС и ПВ корнеплодов сельдерея пахучего. ............................................................................................................. 64
2.5. Разработка фитосубстанции на основе липофильной фракции черешковой ботанической формы сельдерея пахучего ......................................................................................... 64
2.5.1. Прогностическая оценка биологической активности мажоритарных компонентов липофильных фракций сельдерея методом компьютерного моделирования .................................. 64
2.5.2. Разработка методики выделения липофильной фракции из черешковой ботанической формы сельдерея пахучего. ............................................................................................ 65
2.5.3. Выбор критериев качества и разработка проекта нормативной документации для фитосубстанции липофильной фракции сельдерея черешкового в вазелиновом масле. ............... 65
Выводы к главе 2 ......................................................................................................................... 65
4
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ФИТОХИМИЧЕСКОГО СКРИНИНГА СЫРЬЯ APIUM GRAVEOLENS L. ...................................................................................................................................... 67
3.1 Результаты анализа фенольного профиля сырья сельдерея методами ВЭТСХ и УФ-спектрофотометрии. ........................................................................................................................ 67
3.1.1. Результаты ВЭТСХ-анализа содержания фенольных кислот в ботанических формах и сортах сельдерея пахучего ..................................................................................................... 67
3.1.2. Результаты количественного определения суммы гидроксикоричных кислот в ботанических формах сельдерея пахучего ............................................................................................ 69
3.1.3. Результаты количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на апигенин в сортах сельдерея листового ................................................................................................ 70
3.2 Результаты изучения минерального состава ботанических форм и сортов сельдерея .................................................................................................................................................... 71
3.3. Результаты скрининга полисахаридных фракций в ботанических формах сельдерея пахучего .................................................................................................................................. 75
3.3.1. Результаты выделения и очистки полисахаридных фракицй ..................................... 75
3.3.2. Результаты анализа примесей в полисахаридных фракциях. ..................................... 76
3.3.3. Результаты изучения структурных характеристик полисахаридных фракций. ... 78
3.3.4. Анализ молекулярно-массового распределения ВРПС и ПВ корнеплодов сельдерея 84
3.4 Результаты анализа липофильных фракций ботанических форм сельдерея методом ГХ/МС ........................................................................................................................................ 85
3.5. Результаты анализа производных бутилфталида в черешковой ботанической форме сельдерея пахучего ..................................................................................................................... 89
Выводы к главе 3 ......................................................................................................................... 91
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ АНАЛИТИЧЕСКИХ МЕТОДИК КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА СЫРЬЯ APIUM GRAVEOLENS L. ..................................................... 93
4.1. Разработка и валидация методики количественного определения хлорогеновой кислоты в сортах сельдерея листового .............................................................................................. 93
4.2. Оценка сортовых преимуществ листовой ботанической формы сельдерея пахучего по содержанию хлорогеновой кислоты ............................................................................ 96
4.3. Подбор и верификация хроматографических условий для анализа кумаринов и фуранокумаринов в ботанических формах сельдерея листового ........................................... 99
5
4.3.1. Выбор условий элюирования и способа пробоподготовки сырья сельдерея 99
4.3.2. Результаты верификации методики анализа содержания кумаринов и фуранокумаринов в ботанических формах сельдерея пахучего ............................................... 101
Выводы к главе 4 ....................................................................................................................... 109
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА ПРОДУКТОВ НА ОСНОВЕ СЫРЬЯ СЕЛЬДЕРЕЯ ПАХУЧЕГО ............................................................................................................................................. 111
5.1. Разработка фитосубстации на основе водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ сельдерея корневого ..................................................................................... 113
5.1.1. Результаты анализа рынка продуктов специализированного и функционального питания, содержащих полисахариды природного происхождения. ............................................... 113
5.1.2. Результаты модификации методики выделения ВРПС и ПВ из корнеплодов сельдерея .................................................................................................................................................... 119
5.1.3. Выбор и нормирование параметров качества для фитосубстанции на основе ВРПС и ПВ ............................................................................................................................................................ 120
5.1.4. Результаты оценки фармакологической активности ВРПС и ПВ корнеплодов сельдерея .................................................................................................................................................... 123
5.1.5. Концепция разработки порошка для приготовления коктейля на основе фитосубстанции из полисахаридов сельдерея.................................................................................... 125
5.2. Разработка фитосубстанции на основе липофильной фракции черешковой ботанической формы ............................................................................................................................ 126
5.2.1. Прогнозирование биологической активности мажоритарных соединений липофильных фракций Apium graveolens L. ......................................................................................... 126
5.2.2. Выбор оптимальной методики выделения липофильной фракции из черешковой ботанической формы сельдерея пахучего. .......................................................................................... 129
5.2.3. Выбор и нормирование показателей качества липофильной фракции и разработки проекта НД на ее основе. ....................................................................................................................... 131
5.2.4. Концепция разработки мягкой лекарственной формы на основе фитосубстанции липофильной фракции сельдерея черешкового .................................................................................... 132
Выводы по главе 5 ..................................................................................................................... 133
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.......................................................................................................................... 135
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ..................................................................................................... 138
6
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ....................................................................................................... 140
ПРИЛОЖЕНИЕ А ..................................................................................................................... 154
ПРИЛОЖЕНИЕ Б ..................................................................................................................... 162
ПРИЛОЖЕНИЕ В ..................................................................................................................... 168
ПРИЛОЖЕНИЕ Г ..................................................................................................................... 179
ПРИЛОЖЕНИЕ Д ..................................................................................................................... 184
ПРИЛОЖЕНИЕ Е ..................................................................................................................... 187
ПРИЛОЖЕНИЕ Ж .................................................................................................................... 198
ПРИЛОЖЕНИЕ З ...................................................................................................................... 200
