Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 16
1.1. Основные этапы в истории открытия и изучения стволовых клеток 16
1.2. Свойства и классификация стволовых клеток 19
1.3. Эмбриональные стволовые клетки 20
1.4. Фетальные стволовые клетки 24
1.5. Стволовые клетки взрослого организма 25
1.5.1.Гемопоэтические стволовые клетки 25
1.5.2.Мезенхимные стволовые клетки 28
1.5.3.Тканеспецифичные прогениторные клетки 29
1.6. Эндометриальные мезенхимные стволовые клетки человека 29
1.7. Иммортализация и онкогенная трансформация 34
1.8. Генетическая стабильность эМСК в процессе культивирования и возможность спонтанной трансформации 37
1.9. Эндометриоз 40
1.10. Стволовые клетки и стресс 42
1.11.Влияние гипертермии на репарацию ДНК 43
1.12.Влияние теплового шока на мезенхимные стволовые клетки 43
ГЛАВА 2. Материал и методы 45
2.1. Материал 45
2.2. Получение и культивирование эМСК 45
2.3. Оценка морфологии клеток 46
2.4.Иммунофенотипирование 46
2.5.Активность пролиферации 46
2.6.Анализ клеточного цикла 46
2.7.Адипогенная дифференцировка 47
2.8.Остеогенная дифференцировка 47
2.9.Децидуальная дифференцировка 48
2.10.Иммунофлуорисцентный анализ 48
2.11.Криоконсервация и разморозка клеток 49
2.12.Сублетальное температурное воздействие 49
2.13.Кариотипический анализ 49
2.14.Молекулярное кариотипирование 50
2.15. Транскриптомный анализ 51
2.16.Выявление активности SA--gal 51
ГЛАВА 3. Результаты 52
3.1.Характеристика линий эМСК, полученных от здоровых доноров 52
3.1.1.Морфологическая характеристика линий эМСК на ранних этапах культивирования 52
3.1.2. Фенотипирование анализируемых эМСК 53
3.1.3.Оценка пролиферативной активности эМСК in vitro 54
3.1.4. Мультипотентный статус анализируемых эМСК 55
3.1.5.Кариотипический анализ окрашенных на G-диски хромосом 58
3.1.6.Молекулярное кариотипирование анализируемых линий 63
3.1.7.Оценка старения клеточных культур, анализируемых эМСК 65
3.2. Характеристика эМСК, полученных от доноров больных аденомиозом 68
3.2.1.Сравнительный анализ физиологических параметров эМСК от донора с аденомиозом и здорового донора. 69
3.2.2.Оценка генетической стабильности эМСК от доноров с аденомиозом в сравнении с эМСК от здоровых доноров 69
3.2.3.Оценка старения эМСК от донора с аденомиозом 71
3.3. Исследование клеточного ответа на сублетальное температурное воздействие и характеристика клеток, переживших термостресс 72
3.3.1.Стресс индуцированное преждевременное старение эМСК после сублетальноготеплового шока 73
3.3.2.Исследование потомков эМСК, переживших сублетальный тепловой шок 75
3.3.3.Кариотипирование G-бандированных хромосом 77
3.3.4.Молекулярное кариотипировнание 79
3.3.5. Транскриптомный анализ потомков эМСК, переживших тепловой шок 79
3.3.6.Анализ репликативного старения эМСК, переживших тепловой шок 83
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 85
Заключение 94
Выводы 95
Список цитируемой литературы 96
