Введение
Глава I. Обзор литературы .9
1.1. Иммунная система насекомых 9
1.1.1. Распознавание «чужого» 10
1.1.2. Элиминация «чужого» 1.1.2.1. Фагоцитоз 12
1.1.2.2. Инкапсуляция и образование морул .13
1.1.2.3. Коагуляция гемолимфы .14
1.1.2.4. Цитотоксическая реакция .15
1.1.2.5. Меланизация .16
1.1.2.6. Антимикробные пептиды .18
1.2. Антимикробные пептиды насекомых 19
1.2.1. Структурное разнообразие антимикробных пептидов 20
1.2.1.1. Цекропины .20
1.2.1.2. Пептиды, содержащие дисульфидные связи .21
1.2.1.3. Пептиды с регулярно повторяющимися аминокислотами 1.2.2. Механизм действия антимикробных пептидов .23
1.2.3. Жировое тело и его роль в синтезе антимикробных пептидов 24
1.2.4. Другие источники антимикробных пептидов .25
1.2.5. Индукция синтеза антимикробных пептидов 26
1.2.6. Роль эпителия и гемоцитов в индукции синтеза антимикробных пептидов клетками жирового тела
1.2.6.1. Роль эпителия в индукции синтеза пептидных антибиотиков 28
1.2.6.2. Роль гемоцитов в индукции синтеза пептидных антибиотиков .29
1.2.7. Cинтез антимикробных пептидов у Calliphora vicina .30
1.3. Взаимодействие иммунной и нейроэндокринной системы 31
1.3.1. Структурная организация нейроэндокринной системы .31
1.3.2. Основные гормоны насекомых 1.3.2.1. Экдистероиды .32
1.3.2.2. Ювенильный гормон .32
1.3.2.3. Адипокинетический гормон .33
1.3.2.4. Биогенные амины .33 I.3.3 Иммуно-нейроэндокринные взаимодействия .33 1.3.4. Влияние нейроэндокринной системы на иммунные процессы
у Calliphora vicina 35
1.3.5. Роль гормонов в регуляции иммунных процессов у насекомых .36
Глава II. Материал и методы .38
11.1. Биологический материал .38
11.2. Методы 39
11.2.1. Микрохирургические вмешательства .39
11.2.1.1. Инфицирование насекомых .39
11.2.1.2. Наложение лигатур и термическое воздействие 39
11.2.1.3. Сбор гемолимфы и отделение плазмы .40
11.2.1.4. Отделение покровов .40
11.2.1.5. Выделение жирового тела .41
11.2.1.6. Определение жизнеспособности культивируемых клеток 41
11.2.2. Методы концентрации и очистки веществ .41
11.2.2.1. Избирательная денатурация под действием температуры .41
11.2.2.2. Метод твердофазной экстракции 42
11.2.2.3. Метод ультрафильтрации 42
11.2.2.4. Хроматографическое фракционирование .42
11.2.2.5. Масс-спектрометрия
1.2.3. Анализ антимикробной активности материала .43
11.2.4. Статистическая обработка экспериментальных данных 45 Глава III. Индукция синтеза антимикробных пептидов in vivo 111.1. Эффект инфицирования .47
111.2. Эффект стрессорного воздействия
111.2.1. Эффект лигатурного стресса 50
111.2.2. Эффект термического ожога
111.3. Состав антимикробных пептидов, синтезируемых in vivo 53
111.4. Заключение .57
Глава IV. Синтез антимикробных пептидов клетками жирового тела in vitro 61
IV.1. Разработка органной культуры жирового тела .61
IV.1.1. Выбор базового состава культуральной среды 61
IV.1.2. Выживаемость культивируемых клеток .65
IV.1.3. Индукция антимикробной активности in vitro .67
IV.1.3.1. Роль «фактора плазмы» в активации жирового тела 68
IV.1.3.2. Роль «фактора покровов» в активации жирового тела 70 IV.1.3.3. Роль гормонов в активации жирового тела .72 IV.1.4. Стерилизация культуры жирового тела .74 IV.1.5. Температура культуральной среды .79 IV.1.6. Перемешивание культуры 79 IV.1.7. Газообмен в культуре жирового тела 81 IV.1.8. Геометрические параметры культуральной ячейки 83 IV.1.9. Продолжительность цикла культивирования .85 IV.2. Количественные характеристики метода получения антимикробных пептидов
in vitro 87
IV.3. Состав антимикробных пептидов, синтезируемых in vitro 89
IV.4. Заключение .95
Глава V. Поиск факторов активации жирового тела и изучение их свойств 97
V.1. Термостабильность факторов активации жирового тела 97
V.1.1. Термостабильность факторов активации, локализованных в плазме .97
V.1.2. Термостабильность факторов активации, локализованных в покровах .98
V.2. Молекулярная масса факторов активации жирового тела .99
V.3. Хроматографические характеристики факторов активации жирового тела 101
V.4. Видоспецифичность факторов активации жирового тела .102
V.5. Заключение 104
Глава VI. Обсуждение .105
VI.1. Травмогенная индукция синтеза антимикробных пептидов 105
VI.2. Нейрогенная индукция синтеза антимикробных пептидов 111
VI.3. Органная культура жирового тела в иммунологии и биофармакологии насекомых 117
VI.3.1. Органная культура жирового тела как инструмент для изучения механизмов индукции антимикробной активности .117
VI.3.2. Органная культура жирового тела как перспективный источник белков медицинского назначения .119
Выводы .122
Список употребляемых в работе сокращений 124
Список литературы .
