Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1. Общее представление о растительно-микробных патосистемах 14
1.2. Морфофизиологическая гетерогенность микробных популяций 21
1.3. Роль систем гормональной регуляции растений в формировании растительно-микробных патосистем 34
1.4. Растительно-микробные патосистемы, включающие представителей рода Pectobacterium 57
Глава 2. Материалы и методы исследования 67
2.1. Объект исследования 67
2.2. Культивирование P. atrosepticum SCRI1043 67
2.3. Культивирование растений табака и их инфицирование клетками P. atrosepticum SCRI1043 69
2.4. Оценка титра культивируемых клеток P. atrosepticum SCRI1043 в инфицированных растениях 70
2.5. «Оживление» покоящихся клеток P. atrosepticum SCRI1043 71
2.6. Приготовление образцов для световой и электронной микроскопии 72
2.7. Выделение РНК и синтез кДНК при помощи реакции обратной транскрипции 74
2.8. Электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле 74
2.9. Амплификация участков ДНК (кДНК) с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР РВ) 75
2.10. Анализ уровня экспрессии салицилат- и жасмонат- индуцируемых генов у растений табака 78
2.11. Оценка титра геномных копий P. atrosepticum SCRI1043 в инфицированных растениях табака 78
2.12. Выделение различных фракций полисахаридов и их анализ 80
2.13. Проведение иммуноцитохимической реакции с антителами LM19 и INRA-RU 82
2.14. Анализ фенольных соединений с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) 84
2.15. Детекция активных форм кислорода на срезах растений с помощью витального красителя 2,7-дихлорофлуоресцин диацетата 85
2.16. Статистическая обработка данных 86
Глава 3. Результаты и их обсуждение 87
3.1. Динамика титра клеток Pectobacterium atrosepticum SCRI1043 в растении-хозяине (Nicotiana tabacum) 87
3.2. Фенотипическая разнородность клеток P. atrosepticum SCRI1043: влияние условий культивирования на ультраструктуру бактерий 92
3.3. Изменения в ультраструктуре клеток табака и P. atrosepticum SCRI1043 при взаимодействии двух организмов 102
3.3.1. Ранние стадии взаимодействия P. atrosepticum SCRI1043 и табака 102
3.3.2. Острая стадия инфекции, вызываемой P. atrosepticum SCRI1043, у табака. Формирование бактериальных эмболов 105
3.3.3. Миграция клеток P. atrosepticum SCRI1043 в растениях табака 111
3.3.4. Изменения в ультраструктуре клеток P. atrosepticum SCRI1043 после гибели растения-хозяина 115
3.3.5. Ультраструктура клеток P. atrosepticum SCRI1043 и табака при бессимптомной инфекции 118
3.4. Экспрессия жасмонат- и салицилат-индуцируемых маркерных генов в растениях табака при различных типах ответных реакций на инфицирование P. atrosepticum SCRI1043 121
3.5. Роль полисахаридов растительной клеточной стенки в формировании бактериальных эмболов клетками P. atrosepticum SCRI1043 в сосудах ксилемы табака 128
Заключение 142
Выводы 146
Список литературы
