Введение
Глава 1. Основные иммунологические феномены, отражающие формирование толерантности к аллоантигенам плода в репродуктивных процессах 17
1.1. Становление основных направлений исследований толерантности в иммунологии репродукции 17
1.2. Исследование гуморальных реакций и блокирующих факторов сыворотки крови беременных 21
1.2.1. Антитела к антигенам гистосовместимости плода 21
1.2.2. Блокирующие свойства ряда белков ранней беременности 24
1.2.2.1. Прогестерон-индуцированный блокирующий фактор 24
1.2.2.2. Преимплантационный фактор 27
1.2.2.3.Миграцию макрофагов ингибирующий фактор 29
1.3. Субпопуляционный состав и активационное состояние иммунокомпетентных клеток при беременности 32
1.3.1. Основные субпопуляции лимфоцитов при беременности 32
1.3.2. FOXP3+-Т-регуляторные клетки их значимость в формировании толерантности 40
1.3.3. Экспрессия CD69 в оценке активационного состояния иммунокомпетентных клеток 48
1.4. Идиопатический привычный выкидыш как акушерская патология, при которой иммунные нарушения считаются ведущими этиопатогенетическими факторами, и его корригирующая иммуноцитотерапия 51
Глава 2. Материалы и методы исследований 61
2.1. Отбор для исследования пациенток с ИПВ 61
2.2. Характеристика процедуры аллоиммунизации 63
2.3. Характеристика методов иммунологических исследований 65
2.3.1. Определение антилейкоцитарных антител методом проточной 66
2.3.2. Оценка фенотипа лимфоцитов периферической крови 67
2.3.3. Оценка экспрессии раннего активационного антигена CD69 на поверхности лимфоцитов субпопуляций CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD45+CD56+ после митогенной стимуляции in vitro 70
2.3.4. Определение блокирующей активности аутологичной женской сыворотки 71
2.3.5. Оценка содержания в периферической крови лимфоцитов с фенотипом CD4+CD25+lugh и внутриклеточной экспрессией транскрипционных факторов 75
2.3.6. Оценка продукции цитокинов мультиплексным методом с помощью проточной цитометрии 75
2.3.6.1. Определение продукции цитокинов Т1і1/Т1і2-направленности лимфоцитами периферической крови после 24-часовой митогенной стимуляции in vitro методом СВА 75
2.3.6.2. Определение продукции цитокинов Тп1/Т1і2/Т1і17-направленности мультиплексным методом после митогенной стимуляции in vitro клеток цельной периферической крови 76
2.4. Статистические методы анализа 79
Глава 3. Результаты собственных исследований 80
3.1. Клиническая характеристика обследованных пациенток 80
3.2 Характеристика состояния клеточного звена иммунитета женщин с ИПВ 84
3.2.1 Особенности фенотипа лимфоцитов периферической крови пациенток с ИПВ вне беременности 85
3.2.2 Особенности фенотипа лимфоцитов периферической крови пациенток с ИПВ после аллоиммунизации вне беременности 89
3.2.3. Особенности фенотипа лимфоцитов периферической крови пациенток с ИПВ после аллоиммунизации в первом триместре наступившей беременности 91
3.2.4. Особенности фенотипа лимфоцитов периферической крови пациенток с разными исходами беременности 100
3.2.5. Содержание в периферической крови женщин с ИПВ Т-лимфоцитов с фенотипом СБ4+СБ25Ы и внутриклеточной экспрессией транскрипционных 100
3.3. Экспрессия раннего активационного маркера CD69 лимфоцитами периферической крови женщин с ИПВ 115
3.3.1. Особенности экспрессии CD69 лимфоцитами периферической крови после 72-часовой митогенной стимуляции in vitro 116
3.3.2. Активационная способность лимфоцитов периферической крови и блокирующий эффект аутологичной сыворотки пациенток с ИПВ 123
3.3.3. Экспрессия раннего активационного маркера CD69 после краткосрочной митогенной стимуляции in vitro лимфоцитами периферической крови женщин с ИПВ в течение предгестационной подготовки и в I триместре гестации 133
3.4. Продукция цитокинов in vitro митоген-стимулированными клетками периферической крови женщин с ИПВ 145
3.4.1. Продукция цитокинов in vitro митоген-стимулированными клетками цельной периферической крови пациенток с ИПВ в процессе предгестационной аллоиммунизации и в первом триместре наступившей беременности 146
3.4.2. Оценка продукции цитокинов in vitro лимфоцитами периферической крови пациенток с ИПВ в течение пролонгированной беременности 157
3.5. Антиотцовские антилейкоцитарные антитела у женщин с ИПВ 161
3.5.1. Выбор метода определения антиотцовских антилейкоцитарных антител с помощью проточной цитометрии 161
3.5.2. Оценка уровня антиотцовских антилейкоцитарных антител у женщин с ИПВ в процессе предгестационной аллоиммунизации и в первом триместре 165
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 171
Заключение 187
Выводы 191
Практические рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы 194
Список сокращений и условных обозначений 196
Список использованных источников 199
