Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Строение и фотофизические характеристики псораленов
1.2. Фотохимические реакции фурокумаринов 13
1.3. Мембранотоксические эффекты продуктов фотоокисления 15
псоралена
1.4. Общие положения теории РСР 20
1.5. Закон Бунзена-Роско 23
1.6. Современные представления о механизмах развития реакции контактной чувствительности
1.7. Иммунологические эффекты ПУВА-терапии и фотофереза 34
1.8. Методы регистрации апоптоза 38
1.9. Иммунологические эффекты продуктов фотоокисления псоралена 41
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1. Реактивы 44
2.2. Приготовление раствора фотосенсибилизатора и его облучение 44
2.3. Изучение агрегатного состояния и фотолиза псоралена 45 оптическими методами
2.4. Приготовление суспензии эритроцитов и постановка ФОП- гемолиза
2.5. Лабораторные животные, постановка реакции КЧ 47
2.6. Приготовление суспензий клеток лимфоузлов и селезенок, оценка абсолютного числа клеток и пролиферации лимфоцитов в лимфатических узлах
2.7. Оценка уровня секреторных цитокинов 50
2.8. Оценка апоптоза in vivo: подготовка суспензий клеток и цитометрический анализ
2.9. Оценка апоптоза in vitro 53
2.10. Иммуномагнитная сепарация 54
2.11. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение
3.1.агрегация продуктов фотоокисления псоралена 56
3.1.1 Фотоиндуцированная агрегация псоралена, спектры РСР
3.1.2. Измерение спектров возбуждения и эмиссии флуоресценции продуктов фотоокисления псоралена
3.1.3. Влияние тушения флуоресценции на РСР фотопродуктов псоралена
3.1.4. Стабильность фотоиндуцированных агрегатов псоралена во времени
3.1.5. Измерение сигналов РСР при разведении ФОП 67
3.1.6. Зависимость фотоиндуцированной агрегации псоралена от дозы 69 УФА-облучения
3.1.7. Зависимость фотоиндуцированной агрегации псоралена от 72
интенсивности УФА-излучения и концентрации псоралена во время облучения
3.1.8. Исследование спектров РСР и гемолитической активности ФОП при облучении псоралена в бескислородной среде и в присутствии кислорода
3.1.9. Проверка выполнимости закона Бунзена-Роско при фотоиндуцированной агрегации псоралена и при образовании ФОП-гемолизинов
3.1.10. Влияние интенсивности УФА-излучения на образование ФОП- гемолизинов
3.2. Изучение иммунных механизмов ограничения реакции кч при действии фоп
3.2.1. Супрессорное действие ФОП на разные фазы развития реакции КЧ 3.2.2. Действие ФОП на афферентную стадию реакции КЧ в зависимости от способа его введения
3.2.3. Влияние ФОП на динамику накопления клеток в лимфоузлах и селезенках ДНФБ-сенсибилизированных мышей
3.2.4. Измерение пролиферативной активности клеток лимфоузлов под действие ФОП in vivo
3.2.5. Изменение цитокинового профиля клеток лимфоузлов под действием ФОП in vivo
3.2.6. Индукция апоптоза клеток ЛУ продуктами фотоокисления псоралена in vivo и in vitro
3.2.7. Выполнимость закона Бунзена-Роско для проапоптотического действия ФОП на клетки лимфоузлов интактных мышей
3.2.8. Образование агрегатов продуктов ФОП при дозах, вызывающих апоптоз клеток лимфоузлов мышей
3.2.9. Выявление субпопуляции Т-лимфоцитов, ответственной за развитие реакции КЧ к ДНФБ
3.2.10. Выявление специфичности супрессорного действия ФОП при его внутривенном введении мышам
3.2.11. Выявление популяции клеток, ответственных за супрессорное действие продуктов фотоокисления псоралена
Заключение 129
Выводы 132
Список литературы
