Введение
2. Обзор литературы 10
2.1. Семейство протоонкогенов ras 10
2.1.1. Функциональная значимость белков семейства Ras 10
2.1.2. Структура Ras белков 14
2.1.3. Ген K-Ras и канцерогенез лёгких 16
2.2. Единичные нуклеотидные замены 21
2.3. Транскрипционные факторы 31
2.3.1. Транскрипционный фактор NF-Y 32
2.3.2. Транскрипционный фактор GATA-6 37
3. Материалы и методы 44
3.1. Материалы, использованные в работе 44
3.2. Олигонуклеотиды 45
3.3. Животные 46
3.4. Выделение геномной ДНК из лёгких мыши 47
3.5. Получение препаратов ДНК с использованием полимеразной цепной реакции (ПНР) 48
3.6. Выделение продуктов ПЦР из агарозного геля 49
3.7. Получение экстракта ядер лёгких мышей 49
3.8. Введение метки в ДНК с помощью фрагмента Клёнова 51
3.9. Введение концевой метки в ДНК 51
3.10. Метод задержки ДНК-зонда в ПААГ белками ядерного экстракта 52
3.11. Вестерн-блот анализ 5З
3.12. Поиск сайтов гиперчувствительности К ДНК-азе I 54
3.12.1. Обработка ядер клеток легкого ДНК-азой I 54
3.12.2. Гибридизация по Саузерну 55
4. Результаты и обсуждение 58
4.1. Изучение связывания ядерных белков с районом локализации сопряженых с развитием рака легких однонуклеотидных замен в интроне 2 гена K-Ras мыши 58
4.2. Идентификация транскрипционных факторов, взаимодействующих с областью 12-ого кодона гта. K-Ras мыши
4.3. Влияние легочных канцерогенов 3-метил хол антрена и нитрозоэтилмочевины на ДНК-связывающую активность транскрипционных факторов GATA-6 И NF-Y
5. Заключение 87
6. Выводы 89
7. Список цитированной литературы
