Введение
Глава 1. Обзор литературы .10
1.1 Аммиак/аммоний в биологических системах .10
1.1.1 Биофизические характеристики аммиака/аммония .11
1.1.2 Источники аммиака/аммония в организме 12
1.1.3 Токсические эффекты аммиака/аммония .15
1.2 Трансмембранный транспорт аммиака/аммония 18
1.2.1 Rhesus-гликопротеины – транспортеры аммиака/аммония 19
1.2.2 Структура и функции RhAG 25
1.2.3 Патофизиология RhAG .28
1.3 Анионный транспортер AE1 .31
1.3.1 Структура и функции AE1 .32
1.3.2 Взаимодействие AE1 и гемоглобина 37
1.4 Структурная взаимосвязь аммонийного (RhAG) и анионного (AE1) транспортеров 39
1.5 Заключение 41
Глава 2. Объект и методики 44
2.1 Материалы .44
2.2 Методы 45
2.2.1 Доноры .45
2.2.2 Подготовка суспензии эритроцитов .45
2.2.3 Исследование импорта NH3/NH4+ эритроцитами .46
2.2.4 Исследования методом лазерной дифракции .47
2.2.5 Исследования методом проточной цитометрии 47
2.2.6 Ингибирование анионного транспорта 49
2.2.7 Исследования форм гемоглобина спектроскопическим методом 49
2.2.8 Статистический анализ 50
Глава 3. Результаты .51
3.1 Эритроциты человека импортируют аммиак/аммоний .51
3.2 Транспорт NH3/NH4+ в эритроциты человека обусловлен функционированием белков-транспортеров 56
3.2.1 Метод лазерной дифракции для исследования объемных характеристик эритроцитов 56
3.2.2 Скорость начального увеличения объема эритроцитов экспоненциально зависит от температуры среды 60
3.2.3 Скорость начального увеличения объема эритроцитов имеет pH-оптимум при 25 и 37С .63
3.3 Взаимодействие RhAG и AE1 транспортеров 65
3.3.1 HCO3- увеличивает скорость начального увеличения объема эритроцитов .65
3.3.2 Блокатор анионного транспортера DIDS ингибирует гемолиз в аммонийной среде .66
3.4 Взаимосвязь изменения pHi и объема при аммонийной нагрузке 69
3.4.1 Калибровка и выбор красителя 70
3.4.2 Влияние ингибирования анионного транспорта на pHi 71
3.4.3 Взаимосвязь изменения MCV и pHi 72
3.5 Влияние гипоксии на функцию RhAG-AE1 .76
Глава 4. Обсуждение 81
Глава 5. Заключение 88
Выводы 90
Список использованной литературы 91
