Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Этиологическая роль Klebsiella pneumoniae в инфекционной патологии человека 10
1.2. Факторы патогенности энтеробактерий 13
1.2.1. Факторы патогенности Klebsiella pneumoniae 13
1.2.2. Факторы патогенности других условнопатогенных энтеробактерий 21
1.3. ПЦР в идентификации патогенных бактерий и диагностике инфекционных заболеваний 32
ГЛАВА 2. Материалы и методы 42
2.1. Используемые штаммы, среды 42
2.2. Характеристика эталонных штаммов 43
2.3. Полимеразная цепная реакция 44
2.3.1. Подготовка проб 45
2.3.2. Амплификация ДНК 48
2.3.3. Детекция результатов ПЦР 53
2.4. Биологические методы исследования 55
2.4.1. Количественная оценка адгезивной активности 55
2.4.2. Определение гемолитической активности 56
2.4.3. Определение ДНК-азной и РНК-азной активности 56
2.4.4. Определение казеинолитической активности 57
2.4.5. Определение антилизоцимной активности 57
2.4.6 Определение энтерогемолитической активности 58
2.4.7. Изучение адгезии на модели культуры клеток RH 58
2.4.8. Изучение цитотоксического некротизирующего фактора на модели клеточных линий Vero и HeLa 59
2.4.9. Изучение гемаггютинирующей способности 60
2.4.10. Определение вирулентности штаммов K.pneumoniae при внутрибрюшинном заражении белых мышей 60
2.5. Серологическое типирование K.pneumoniae 60
2.6. Определение чувствительности к антибиотикам 61
2.7. Методы статистического анализа 61
ГЛАВА 3. Результаты исследований
3.1. Коллекция клинических штаммов Klebsiella pneumoniae и их общая характеристика 62
3.2. Характеристика биологических свойств клинических изолятов Klebsiella pneumoniae 73
3.3. Изучение нуклеотидных последовательностей генов, обеспечивающих адгезию Klebsiella pneumoniae на эпителии 74
3.3.1. Определение нуклеотидных последовательностей генов, контролирующих синтез фимбрий S, Р и 1 типа у клинических штаммов Klebsiella pneumoniae 75
3.3.2. Определение нуклеотидных последовательностей еаеА гена у клинических штаммов K.pneumoniae 77
3.4. Изучение адгезии штаммов Klebsiella pneumoniae на клеточных линиях RH 85
3.5. Изучение генетических детерминант, обеспечивающих размножение возбудителя в тканях 86
3.6. Изучение генетических детерминант токсинообразования у клинических штаммов Klebsiella pneumoniae 88
3.6.1. Обнаружение нуклеотидных последовательностей cnf-1 гена у клинических штаммов Klebsiella pneumoniae 89
3.6.2. Обнаружение нуклеотидных последовательностей генов, контролирующих синтез шигаподобных энтеротоксинов 1 и 2 типа, у штаммов Klebsiella pneumoniae 90
3.6.3. Определение генетических детерминант, контролирующих синтез гемолизинов, у клинических штаммов Klebsiella pneumoniae 91
3.7. Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей генов патогенности у клинических изолятов K.pneumoniae 92
3.8. Фенотипическая экспрессия факторов патогенности Klebsiella pneumoniae 97
3.8.1. Энтерогемолитическая активность клебсиелл 97
3.8.2. Гемолитическая активность клебсиелл 98
3.8.3. Фенотипическая экспрессия цитотоксического некротизирующего фактора-1 98
3.8.4. Гемагглютинирующая активность K.pneumoniae 101
3.9. Оценка патогенности клинических штаммов Klebsiella pneumoniae in vivo 101
Обсуждение результатов 107
Выводы 115
Список литературы 117
