Введение
І 2.1. Бактериальные токсины и их классификация 10
2.1.1. Энтеротоксины семейства Enterobacteriaceae в свете современной классификации 13
2.1.2 Распространение в природе 16
2.1.3. LT-энтеротоксины 18
2.1.4. ST-энтеротоксины 20
2.1.5. Шига-токсины 24
2.2. Строение генов токсинообразования 25
2.2.1. Строение генов LT 25
2.2.2. Строение генов ST 28
2.2.3. Регуляция синтеза токсинов на генном уровне 29
2.3. Факторы адгезии 36
2.4. Локализация генов токсинообразования в геноме бактерий... 41
2.4.1. Хромосомная локализация генов токсинообразования 41
2.4.2. Внехромосомная локализация генов токсинообразования 43
2.4.2.1. Плазмиды 43
2.4.2.2. Транспозоны 47
2.4.2.3. Бактериофаги 48
2.5. Генетический обмен 51
2.5.1. Роль внехромосомных элементов в формировании токсического фенотипа и распространении токсикоинфекций 51
2.5.2. Трансформация. 52
2.5.3 Конъюгация 54
2.5.4. Трансдукция 56
3. Материалы и методы 60
3.1. Штаммы бактерий и бактериофагов 60
Используемые реактивы и среды 60
Буферные растворы и среды 61
Выделение плазмид с помощью щелочного лизиса 62
Выделение высокомолекулярной плазмидной ДНК 62
Выделение ДНК модифицированным методом Экхарда 63
Проведение расщепления ДНК рестриктазами 63
Электрофорез ДНК 64
Трансфекция 64
Транспозиция 66
Получение препаратов фагаМ 13 66
Определение титра бактериофагов 67
Конъюгация 68
Спот-тест 69
Экспериментальная часть 70
Определение оптимальных условий выделения плазмидной ДНК 70
Анализ плазмидных профилей изучаемых штаммов... 71
Анализ обнаруженных плазмид на наличие генов токсинообразования 75
Рестрикционный анализ плазмид, кодирующих токсинообразование 78
Определение молекулярной массы плазмид 81
Определение копийности изучаемых плазмид 83
Изучение влияния дозы гена на уровень продукции токсинов .. 90
Изучение возможности переноса генов токсинообразования между различными штаммами Е. сои" 93
Обсуждение результатов 97
Выводы 104
Практические предложения 105
Список использованной литературы 106
