Введение
Глава 1. Спиртовые дрожжи Saccharomyces 10
1.1. ДНК-ДНК реассоциация 11
1.2. Гибридологический анализ 11
1.3. Секвенирование и ПДРФ-анализ рибосомальных последовательностей 13
1.4. Молекулярное кариотипирование 15
1.5. Современная классификация дрожжей Saccharomyces 16
1.5.1 Saccharomyces cerevisiae 17
1.5.2. Saccharomyces bayanus 18
1.5.3. Saccharomyces paradoxus 20
1.5.4. Дикие дрожжи S. arboricola, S. kudriavzevii и S. mikatae 20
1.5.5. Межвидовые гибриды Saccharomyces 21
1.6. Селекция спиртовых дрожжей Saccharomyces 22
Глава 2. Полимерные гены ферментации сахаров 25
2.1. -Фруктозидазные гены SUC ферментации сахарозы 25
2.2. Полимерные гены MAL, контролирующие ферментацию мальтозы 29
2.3. -Галатозидазные гены MEL ферментации мелибиозы 32
Глава 3. Молочные дрожжи рода Kluyveromyces
3.1. Роль пробиотических микроорганизмов 35
3.2. Современная таксономия дрожжей рода Kluyveromyces 36
3.3. Kluyveromyces lactis 39
3.4. Kluyveromyces marxianus 41
3.5. Полимерные -галактозидазные гены LAC, контролирующие ферментацию лактозы
Экспериментальная часть 46
Глава 4. Материалы и методы исследования 46
4.1.Объекты исследования и методы культивирования дрожжей 46
4.2. Физиологическая характеристика штаммов 58
4.2.1. Способность дрожжей сбраживать сахара 58
4.2.2. Скорость сбраживания сахаров 58
4.2.3. Тест на устойчивость штаммов к повышенной температуре 59
4.3. ПЦР-анализ 59
4.3.1. Амплификация рибосомальных последовательностей 59
4.3.2 Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) 60
4.3.3. Изоляция ДНК 60
4.3.4. Амплификация генов ферментации сахаров 61
4.4. Секвенирование -фруктозидазных генов SUC и филогенетический анализ
4.5. Молекулярное кариотипирование и Саузерн-гибридизация 62
4.5.1. Выделение интактной хромосомной ДНК 62
4.5.2. Пульс-электрофорез хромосомной ДНК 62
4.5.3. Саузерн-гибридизация хромосомных ДНК 63
Глава 5. Молекулярно–генетические особенности и селекция спиртовых штаммов Saccharomyces cerevisiae
5.1 Молекулярная идентификация спиртовых штаммов
5.1.1. ПДРФ–анализ 5.8S - ITS фрагментов рДНК 66
5.1.2. Молекулярное кариотипирование
5.2. Саузерн-гибридизация 70
5.3. Физиологические особенности изученных штаммов 74
5.3.1. Ферментация мальтозы, сахарозы и мелибиозы 74
5.3.2. Термоустойчивость 74
5.3.3. Ферментационная активность 74
5.4. Селекция спиртовых штаммов дрожжей S. cerevisiae 75
5.4.1. Скрининг термоустойчивых штаммов 75
5.4.2. Межштаммовые гибриды S. cerevisiae 78
5.5. Обсуждение 80
Глава 6. Молекулярный полиморфизм -фруктозидазных генов SUC дрожжей Saccharomyces
6.1. Хромосомный полиморфизм генов SUC 84
6.2. Нуклеотидный полиморфизм генов SUC дрожжей S. cerevisiae и S. paradoxus
6.3. Нуклеотидная последовательность гена SUCa дрожжей S. arboricola 90
6.4. Сравнительный анализ аминокислотных последовательностей -фруктозидаз дрожжей Saccharomyces
6.5. Обсуждение 93
Глава 7. Молочные дрожжи-пробиотики рода Kluyveromyces
7.1. Молекулярная идентификация штаммов 94
7.2. Физиологические особенности изученных штаммов 98
7.3. Молекулярный полиморфизм Kl. marxianus
7.3.1. Пульс-электрофорез нативных хромосомных ДНК 99
7.3.2. Саузерн-гибридизация хромосомной ДНК штаммов Kl. marxianus с зондами LAC4 и LAC12
7.3.3. Ферментационная активность штаммов Kl. marxianus
7.4. Молекулярные кариотипы и физиологические особенности дрожжей Kl. lactis
7.5. Обсуждение 107
Заключение 109
Выводы 115
Список литературы
