Введение
1. « Супрессорный » путь развития карцином желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) человека
1.1 Модель Фогелыитейна для спорадических колоректальных карцином 13
1.2 Белок р53 и его участие в канцерогенезе ЖКТ человека 16
1.2.1. Структура белка р53: домены и их функции 16
1.2.2. Роль белка р53 в формировании ответа клетки на стресс 17
1.2.3. Повреждения генар53 в опухолях ЖКТ 21
2. « Мутаторный» путь развития карцином ЖКТ
2.1. Система коррекции неспаренных оснований ДНК (КНО) 23
2.1.1. Функциональные комплексы белков системы КНО 23
2.1.2 Участие белков системы КНО в апоптозе клетки в ответ на повреждения ДНК 26
2.1.3. Микросателлитная нестабильность генома (МНГ) —маркер дефектной работы системы КНО 29
2.2 Нарушения функционирования системы КНО, МНГ и канцерогенез ЖКТ 31
2.2.1. Наследственные мутации генов системы КНО и предрасположенность к развитию наследственного неполипозного рака толстой кишки (ННРТК) 31
2.2.2. Спорадические карциномы ЖКТ и МНГ 36
2.2.3. Эпигенетические механизмы регуляции экспрессии генов системы КНО и их роль в развитии опухолей ЖКТ 37
2.2.4. Различный уровень МНГ в опухолях ЖКТ. Маркеры для определения МНГ 38
2.2.5 Гены-мишени дефектной работы системы КНО и их участие в развитии карцином этой этиологии 40
3. Альтернативность генетических путей развития злокачественных новообразований ЖКТ
3.1 Генетическая картина заболевания и его фенотипические проявления 46
3.2 Диагностические процедуры с использованием МНГ для определения генетического пути развития злокачественного новообразования ЖКТ. Нерешенные вопросы 50
4. Множественные злокачественные новообразования ЖКТ
4.1. Критерии диагностики и клиническая классификация первично- множественных опухолей 51
4.2 МНГ - генетический маркер предрасположенности к полинеоплазии ЖКТ. Образование множественных опухолей ЖКТ путем метастазирования или независимого развития карцином 55
4.3 Перспективы генетических исследований множественных злокачественных новообразований 57
Материалы и методы
1. Клинические характеристики исследованных опухолей 57
2. Выделение ДНК из парафиновых срезов и клеточных культур...63
3. Анализ изменения длины микросателлитных маркеров и мутаций в генах мишенях дефектной работы системы КНО 65
3.1. Полимеразная цепная реакция 65
3.2. Анализ мутационных повреждений исследуемой ДНК 68
3.2.1. Анализ SSCP 68
3.2.2. Электрофорез в денатурирующих условиях (ЭФДУ) 69
4. Идентификация наследственных генетических повреждении в генах hMLHl и hMSH2 системы КНО 71
5. Поиск мутаций в генер53 в опухолях ЖКТ 75
6.. Статистическая обработка результатов 76
Результаты и обсуждение
1. Поиск корреляции между уровнем МНГ и повреждениями гена р53 77
1.1. МНГ карцином ЖКТ человека и различия в уровне МНГ для индивидуальных опухолей. Определение класса МНГ карцином ЖКТ 77
1.2. Уровень МНГ карцином ЖКТ и наличие мутаций в гене р53. Поиск корреляции между уровнем МНГ и мутациями генар53 83
1.3. Тест-система для определения генетического пути развития опухоли 89
2. Генетический анализ множественные карцином ЖКТ человека...92
2.1. Полинеоплазия, инициированная наследственным повреждением системы КНО 92
2.1.1. Генетические повреждения в генерЗЗ и маркерах МНГ. Выявление наследственных мутаций в генах системы КНО 93
2.1.2. Генетической схема прогрессии ННРТК, сопровождающегося множественными карциномами ЖКТ. 98
2.2. Альтернатива при образовании множественных опухолей: метастазирование или независимое развитие. Выявление «природы» множественных карцином на основе их генетического анализа 105
Выводы 108
Список работ, опубликованных по теме диссертации 109
Список цитируемой литературы 111
